产品描述
本产品为hPSC诱导分化心脏类器官试剂盒，人多能干细胞hPSC通过该试剂盒诱导分化可得到心脏类器官，该类器官由心肌细胞、心外膜细胞等细胞组成，成熟后的类器官有腔室结构，具有早期搏动功能。
本试剂盒需要操作人员具有hPSC培养经验，对类器官具有一定了解。
规格数量
使用低吸附96孔板，可诱导2板192个心脏类器官，成功率70-80%。
实验仪器、材料
仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱
材料：细胞培养板（规格为：96孔）、离心管（规格为15 mL、50 mL）、移液器（规格为 10 μL、100 μL、1000 μL）、无菌吸头（规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL）、移液管（规格为10mL、50mL）
实验试剂
研究阶段 | 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 储存 |
Ⅰ阶段（D0-2） | IMV-C01 | 基础培养基1 | 20mL | -20℃，12个月 |
IMV-C01-A | 补充剂A | 40μL | -20℃，6个月 | |
Ⅱ阶段 （D3-4） | IMV-C02 | 基础培养基2 | 20mL | -20℃，12个月 |
IMV-C01-B | 补充剂B | 420μL | -20℃，6个月 | |
Ⅲ阶段（D5-6） | IMV-C03 | 基础培养基3 | 20mL | -20℃，6个月 |
IMV-C03-C | 补充剂C | 500μL | -20℃，6个月 | |
Ⅳ阶段（D7-20） | IMV-C04 | 成熟培养基 | 200mL | -20℃，12个月 |
实验内容与方法
1、Ⅰ阶段（D0-2）（按1个96孔板，每孔100μL算）
（1）hPSC于基质胶包被的六孔板的一个孔生长至70-80%汇合度。
（2）吸去培养基。
（3）孔中加入1mL PBS（无钙镁离子）洗，吸去。
（4）孔中加入1mL Accutase，37℃消化3min。
（5）消化完成后于显微镜下可看到克隆发白发亮。轻拍孔板侧边几下，使细胞脱离板底，加入1mL hESC/iPSC 完全培养基终止消化，并使用P-1000吸头将这2mL细胞单悬液收集到15mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
（6）离心结束，去除上清至剩20ul，轻弹管底3-4下，将1 mL预热的hESC/iPSC 完全培养基（含10μM Y-27632）重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。
（7）使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞 ，按每孔5000个细胞的比例将所需细胞收集到离心管中，将基础培养基1与补充剂A充分混合，将上面1mL细胞悬液加入9mL的含补充剂A的基础培养基1中，将细胞吹打均匀，然后按每孔100μL的体积将细胞悬液接种到96孔板中，1000rpm离心5min，然后将孔板转移到37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育3天。
2、Ⅱ阶段（D3-4）
第3天，将基础培养基2与补充剂B充分混匀，配置成Ⅱ阶段培养基，从孔中抽吸培养基，按每孔100μL的体积将Ⅱ阶段培养基加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，连续培养2天。
3、Ⅲ阶段（D5-6）
第5天，将基础培养基3与补充剂C充分混匀，配置成Ⅲ阶段培养基，从孔中抽吸培养基，按每孔100μL的体积将Ⅲ阶段培养基加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，连续培养2天。
4、Ⅳ阶段（D7-21）
（1）第7天，从孔中抽吸培养基，按每孔100μL的体积将基础培养基4加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，开始长期培养，每2天换一次培养基。
（2）心脏类器官将在分化后的10-13天开始跳动，进一步培养后第19-21天取样鉴定。
参考图及流程图
阶段性测试
HE 染色
免疫荧光鉴定
培养类器官图片
细胞分群注释结果
