Cat.No | 产品名称 | 规格 | 储存条件 | 保质期 |
IMC-021-M | CD 293 无血清培养基 | 500mL | 4℃ | 12个月 |
产品简介
CD 293无血清培养基是用于HEK293细胞无血清悬浮培养和目标分子表达的培养基。产品中含有 4mM 谷氨酰胺、6g/L 葡萄糖、1.5 g/L PF68 等有利于HEK细胞无血清生长和表达的组分。产品不含任何动物源成分、蛋白、水解物、酚红和 EDTA，有利于建立稳定的 HEK细胞无血清表达系统。CD 293无血清培养基是一种化学成分界定的培养基，用于支持多种 HEK细胞无血清高密度生长以及高效转染表达，在转染后的表达阶段同时配套使用CD 293 Feed ，可以应用于重组蛋白的表达以及腺相关病毒 (Adeno-Associated Virus, AAV)、慢病毒 (Lentivirus, LV)、腺病毒 (Adenovirus,AdV) 等病毒载体的包装和扩增。
产品参数
外观 | 澄清液体 |
渗透压 | 265~340mOsm/kg |
无菌检测 | 无菌 |
内毒素 | <3 EU/ml |
PH | 6.9-7.4 |
适用范围 | HEK293（293F、293E、293H、293FT、293S）悬浮细胞 |
产品特点
专用于HEK293无血清的悬浮培养与高效的转染表达
无动物源组分，无血清，无抗生素
转染前后无需更换培养基
质控严格，效果稳定
使用说明
一、细胞复苏
1. 在 37℃水浴中快速解冻（<1 分钟）冻存管中的细胞。
2. 将全部细胞液转移至含有 30 mL 预热的CD 293无血清培养基的 50 mL 无菌离心管中，233 ×g（约 1000 rpm）离心5 分钟，弃上清，使用 20 mL CD 293无血清培养基重悬，此时细胞密度应为 0.4–0.6×106cells/mL。
3. 参照“培养条件”培养细胞。
4. 72 ± 4 小时，进行细胞的传代扩增，传代方法参照“细胞传代与扩增”步骤。
二、细胞传代与扩增
1. 复苏后72±4小时细胞处于对数生长中期，此时检测活细胞密度 (×106cells/mL) 及细胞活率(%)，进行细胞传代。
2. 当活细胞密度≥2.0×106cells/mL，活率>90%，按照 0.8–1.2×106 cells/mL 的接种密度进行传代，参照“培养条件”进行培养。
3. 瞬时转染前，细胞需要在 CD 293 无血清培养基中至少进行 3 次传代。
三、细胞适应性传代
直接适应
1. 将培养至对数生长中期、细胞活率>90%的细胞从其他培养基中直接接种到 CD 293 无血清培养基中，接种密度为0.8–1.2 × 106 cells/mL，参照“培养条件”进行培养。
2. 建议首次转移后每天检测活细胞密度 (× 106 cells/mL) 及细胞活率 (%)。
3. 若细胞密度在接种后第 3 天达到 4 × 106 cells/mL 左右，活率>90%，可视为细胞已成功适应 CD 293 无血清培养基。
4. 细胞适应后，至少传代 3–5 次，待细胞生长稳定后再开展其它应用。
梯度适应
1. 如果细胞在直接驯化时状态欠佳，建议采用梯度驯化。
2. 按照 0.8–1.2×106cells/mL 的密度接种，将细胞逐步适应至原培养基与 CD 293 无血清培养基以不同比例 ( 90:10、75:25、50:50、25:75、0:100) 混合的培养基中。
3. 每种混合培养基进行传代时，如果细胞密度达到3×106cells/mL 左右，活率>90%，方可进行下一个梯度的驯化。
一般需要传代 2–3 次，可根据细胞生长状态进行调整。
4. 在 100%使用 CD 293 无血清培养基接种第 3 天后，若细胞密度稳定在 4 × 106 cells/mL 左右，活率> 90%，可视为细胞已成功适应 CD 293 无血清培养基。
5. 细胞适应后，至少传代 3–5 次，待细胞生长稳定后再开展其它应用。
四、细胞冻存
建议采用处于对数生长期，细胞活率>90%细胞进行冻存。
1. 以 90% CD 293 无血清培养基与 10% DMSO 混合制备冻存培养基，储存于 2-8℃预冷直至使用。
2. 检测活细胞密度 (×106cells/mL)，计算出冻存培养基所需的体积，使得最终冻存体积为每支 1mL，冻存密度为10.0×106 cells/mL。
3. 细胞液通过 233×g（约 1000 rpm）离心5分钟，弃上清，收获细胞重悬至预定体积的冻存培养基中得到细胞冻存悬液。
4. 将细胞冻存悬液分装至冻存管中，立即转移至已经预冷的程序降温盒中，进行程序降温后，转入液氮罐长期保存。
五、培养条件
培养方式：悬浮
培养容器：TPP管/摇瓶
摇床转速：TPP 管培养，轨道直径为 50 mm 的摇床，建议 200 rpm；
摇瓶培养，轨道直径为 25 mm 的摇床，建议 125–150 rpm；
摇瓶培养，轨道直径为 50 mm 的摇床，建议 90–120 rpm。
培养温度：37℃
CO2浓度：5%
相对湿度：80% RH
基础培养基 | 补料 | 补料时间点 | 补料量 | 培养条件 | 备注 | |
瞬转蛋白表达工艺 | CD 293 | CD 293 Feed | 质粒转染后24h | 7% | 37℃、 5% CO2、 80% RH
| 建议质粒转染后 96h 额外加 2g/L 葡萄糖； |
AAV、AdV和LV生产工艺 | CD 293 | CD 293 Feed | 质粒转染后24h | 5% | ||
CD 293 | CD 293 Feed | 质粒转染后24h | 8% |
