产品描述
B细胞淋巴瘤类器官试剂盒是一款适用于原代人源淋巴瘤类器官构建和稳定培养的试剂。该试剂盒可实现人源淋巴瘤类器官的体外培养，保持类器官的最佳的生长状态，培养后的类器官可用于药理和毒理等生物学基础和临床应用研究。
产品信息
表1. 试剂盒组成信息
规格 (1kit) | 产品名称 | 储存 |
100mL | B细胞淋巴瘤类器官完全培养基 | -20 ℃，12个月 |
200mL | 类器官专用基础培养基 | 2～8℃，18个月 |
20mL | 红细胞裂解液 | 2～8℃，24个月 |
20mL | 类器官组织保存液 | -20℃，18个月 |
20mL | 类器官抗粘附液 | 2～8℃，18个月 |
表2. 其他自备材料和试剂
产品货号 | 产品名称 | 品牌 |
- | 超低吸附96孔板 | - |
B细胞淋巴瘤类器官完全培养基使用说明
1. 收到B细胞淋巴瘤类器官完全培养基后，将培养基置于四度冰箱进行解冻；
2. 将解冻后培养基上下颠倒充分混匀，在无菌的生物安全柜或超净工作台中将培养基进行分装，推荐分装成10 ml规格；
3.将分装后的培养基储存于-20℃，使用时拿出分装后的培养基解冻后即可使用。
注意：
l 分装后的类器官培养基需储存于-20℃，有效期一年，注意避免反复冻融；
l 解冻后类器官完全培养基可在 4°C 储存，建议在两周内使用；
l 类器官培养基中内含有抗生素。
类器官专用基础培养基使用说明
1. 可用于类器官原代建立时组织的清洗和消化后组织的重悬（建议加入1%双抗）；
2. 可用于类器官复苏时的清洗，以去除残余冻存液；
3. 用于类器官传代、冻存时类器官的清洗；
4. 可以自行添加生长因子等成分配置成类器官完全培养基。
注意：
l 类器官专用基础培养基可在4℃冰箱中稳定保存，建议分装后使用；
l 本产品不含任何抗生素，如果需要请额外添加。
淋巴瘤类器官的建立与传代培养
原代淋巴瘤类器官的建立
注意：涉及人体生物样本的研究必须遵循所有相关的机构和政府法规。在收集人体生物样本之前，必须获得样本提供者的知情同意。
1．将收集到的淋巴瘤肿瘤组织浸泡于装有2-8℃类器官组织保存液的样本保存管中，样本转移运输过程中需全程保持2-8℃，尽量缩短运输时间。
2．转移肿瘤组织至细胞培养皿中，使用无菌手术剪刀或手术刀和镊子尽可能多地去除脂肪、肌肉或坏死组织等。
注意：移取组织、类器官前枪头、离心管等都应用类器官抗粘附液（IMV-A003）润洗，以减少类器官损失。后续不再特意注明。
3．用2-8℃组织清洗液清洗组织3次，洗去组织表面残渣。
注意：原代分离过程中清洗所用的类器官专用基础培养基应加入1%双抗，从而减少后续污染的可能。
4．样品在冰上置于类器官基础培养基中，对淋巴瘤类器官原代组织进行机械解离，过滤，形成单细胞悬液。
5. 弃去类器官专用基础培养基后，加入红细胞裂解液，4℃摇床裂解红细胞5min。
6．去除红细胞裂解液，用类器官专用基础培养基清洗淋巴瘤组织碎片2-3次。
7．将淋巴瘤单细胞以 7.5×106 /mL重悬于淋巴瘤类器官培养基中，每孔体积 200 μL1.5×106 个活细胞接种于平底的 96 孔超低吸附培养板中。
8． 37℃，5% CO2恒温培养箱培养，每一天换液30％的新鲜人淋巴癌培养基，大约在4天左右初步建成淋巴瘤类器官。
淋巴瘤类器官的传代培养
1. 当细胞密度达到 2×107 时进行传代， 以 7.5×106 /mL重悬于淋巴瘤类器官培养基中，每孔体积 200 μL1.5×106 个活细胞接种于平底的 96 孔超低吸附培养板中。
2. 如有需要进行流式细胞术检测淋巴瘤细胞占类器官所有细胞的比例标志分子表达情况。
3. 人 B 细胞淋巴瘤类器官细胞的纯度可以在第5天通过细胞流式进行测量（CD3，CD56，CD19的阳性率）。 在第 5 天，>80% 的细胞表达 CD19，不表达 T 细胞（CD3）或 NK（CD56）标记。结果可能因使用的临床样本而异。
注意事项
1. 本产品仅适用于科研用途，使用前请仔细阅读本说明书。
2. 本产品实验操作均为无菌操作，所有消耗品均应灭菌后一次性使用。
3. 使用完本产品后需密封避光保存，以避免试剂污染或失效。
