THP-1细胞背景介绍
THP-1人单核细胞白血病细胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。
THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。
ATCC细胞库THP-1细胞图片
逸漠细胞库THP-1细胞图片
THP-1细胞的特点
1.THP-1细胞为悬浮生长，部分细胞聚集成团，部分细胞分散。
2.THP-1细胞喜欢酸性环境
在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。
3.THP-1细胞有密度依赖性
THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在50万-100万细胞/毫升为宜；超过200万/毫升则需要传代。
4.THP-1细胞对血清要求高
血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。选择品质好的血清更有利于THP-1细胞生长。
THP-1细胞培养实验准备
提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面。
器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头、滤器、吸管、多孔培养皿、6cm皿、培养瓶等。
试剂：1640培养液、缓冲液、PBS、消化液、血清、抗生素、2-巯基乙醇。
THP-1细胞培养条件
THP-1细胞培养基：90% 1640+10% FBS+PS+ 0.05 mM 2-巯基乙醇（2-mercaptoethanol）
THP-1细胞传代比例：1:2至1:3，每周 2-3次
THP-1细胞代次密度：如果THP-1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件：无血清冻存液（或者冷冻保存液：90%血清，10%DMSO，现用现配），液氮储存
消化时间：1-3min（视细胞情况而定）
THP-1细胞培养注意事项
THP-1属于悬浮细胞，显微镜下可见细胞呈圆形，透明度高，背景干净，碎片很少，说明细胞状态很好。
2.THP-1常用RPMI 1640培养基，含10%胎牛血清，在37度、5% CO2培养箱中培养。特别注意的是THP-1喜欢酸性环境，对培养基pH值的变化很敏感，通常培养基颜色呈橘红色时细胞最适宜生长。所以尽量使用相同Ph的1640。
3.THP-1细胞有密度依赖性，低密度时细胞生长慢，建议细胞量维持在每毫升50-100万为宜，超过10^6/ml即可传代，传代比例采用1:3~1:4，换液不需要太频繁，正常2~3天换1次液即可。
注意细胞的密度一定要高，介于5×105—— 106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。
4.传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般THP-1 生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增
5.THP-1细胞培养时需要添加0.05mM的β-巯基乙醇。
6.THP-1细胞培养时可能会有部分细胞聚团生长，若细胞团块过大过多，应当轻轻将其吹散。
THP-1细胞培养操作
THP-1细胞复苏方法
1.将含有1 mLTHP-1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2.THP-1细胞在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1 mL 10%FBS 1640培养基后吹匀；
3.将所有THP-1细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜；
4.第二天检查THP-1细胞密度。
THP-1细胞传代步骤
如果THP-1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
方法一
收集THP-1细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液
补加1-2ml培养液后吹匀，将THP-1细胞悬液按1:2的比例分到新的含10ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二
可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起
将THP-1细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
备注：第一次传代时，若培养基中有细胞碎片，则将细胞悬液装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀，按1:1分到新的装有10mL新鲜培养基的培养皿中，置于培养箱中培养。
THP-1细胞冻存步骤
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面10cm皿为例;
1.收集THP-1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，加 1 mL新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数。
2.根据THP-1细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
THP-1细胞培养常见问题及解决方法
1.THP-1细胞冻存过后复苏困难怎么办？
a.冻存前细胞状态较好, 冻存总量不低于1*106/支
b.复苏后细胞接种密度建议3*106/ml
c.如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除
2.THP-1细胞收货时出现伪足，或是碎片较多怎么办?
受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些THP-1细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。
处理方法
收集THP-1细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液重新分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3.THP-1细胞培养过程中细胞发生贴壁怎么处理?
THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。
处理方法
只需将THP-1细胞悬液转移至新瓶中即可。但如果当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。
4.THP-1细胞培养过程中细胞发生聚团怎么办？
THP-1细胞培养过程中出现少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是THP-1细胞密度较低时，易出现这种情况。
处理方法
可以更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。
5.THP-1细胞培养基里一定要加β-巯基乙醇吗？
β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
6.THP-1细胞镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？
THP-1细胞形态特征悬浮生长，悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10分钟使细胞沉底，之后再轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度。
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