产品描述
AO/PI双染试剂盒(AO/PI Double Staining Kit)是一种可以快速检测细胞状态的试剂盒。本试剂盒提供两种核染料，吖啶橙 (Acridine Orange， AO) 和碘化丙啶PI。
AO可以穿透细胞膜， 将正常细胞染成绿色或黄绿色。当细胞凋亡时， 染色体会固缩或者断裂成大小不一的片段。此时AO可以将凋亡细胞染上致密浓染的黄绿色或染成黄绿色碎片。另一种核染料PI不能透过细胞膜， 不能将正常细胞或凋亡细胞染上红色，只能染细胞膜受损的细胞， 如坏死细胞。当使用这两种染料双染时， 正常细胞为绿色或黄绿色荧光，凋亡细胞为大小不一的致密黄绿色荧光，坏死细胞为强烈的红色荧光。
产品信息
表1. 试剂盒组成信息
产品类别 | 产品名称 | 产品规格 | 储存 |
500T | AO Staining Solution | 5*500uL | -20℃避光，12个月 |
PI Staining Solution | 5*500uL | -20℃避光，12个月 | |
10X Staining Buffer | 5*1mL | -20℃避光，12个月 | |
100T | AO Staining Solution | 500uL | -20℃避光，12个月 |
PI Staining Solution | 500uL | -20℃避光，12个月 | |
10X Staining Buffer | 1mL | -20℃避光，12个月 |
实验操作
1. 配制1X染色缓冲液： 根据实验所需取适量10X染色缓冲液用超纯水稀释成1X染色缓冲液。
2. 准备样品： 收集细胞， 用PBS洗涤两次后重悬于适量1X染色缓冲液中并使细胞密度为1x106 cells/mL。
注：贴壁细胞如直接进行原位观察， 可以将细胞接种在 96 孔板中， 接种密度为 4~8× 104 cells/mL 。原位观察时可以不用消化收集细胞，去除培养基后用 PBS 洗涤两次。随后原位孵育探针和检测。
3. 染色: 取90 μ L细胞悬液， 加入5 μL的AO染色液和5 μL的PI染色液，混匀后室温避光孵育1-10 min。
注：不同细胞染色时间可能存在差异，需自行摸索。
4. 检测: 孵育结束后， 用PBS洗涤2次。随后加入适量PBS后即可用荧光显微镜或者流式细胞仪进行检测。AO结合DNA后的Ex/Em为502/525 nm； PI结合DNA后的Ex/Em为535/617 nm 。如使用荧光显微镜观察， 可分别使用FITC和Cy3滤光片进行观察。
注：染色后需要尽快检测。
注意事项
1. 染色完成后需要尽快进行检测。
2. 荧光染料容易淬灭，使用和保存时都需要注意避光。
3. PI对人体有害， 使用时请注意防护。
