产品简介
DiOC2(3)(3,3′-Diethyloxacarbocyanine,碘化物)是一种广泛应用的膜电位探针。如用于线粒体膜电位的研究，DiOC2(3)能够穿透真核细胞的细胞质，在浓度低于100 nM时，染料在具有活跃膜电位的线粒体中积累，形成红色荧光聚集体，当使用破坏线粒体膜电位的（如CCCP）处理细胞时，DiOC2(3)染色强度降低。DiOC2(3)染色的细胞可以通过流式细胞仪的蓝色激发， 绿色和红色发射可视化。该试剂可与其他试剂搭配使用，例如红色激发的Annexin V-APC，用于活力和凋亡的研究。
产品信息
表1.组成信息
产品名称 | 产品规格 | 储存条件 | 保质期 |
DiOC2(3) 膜电位荧光探针 | 20mg | -20℃ | 12个月 |
使用说明
1.DiOC2(3)标记细胞
由于细胞类型、培养条件的差异以及应用方向的不同， 建议起始浓度50nM摸索最佳染色条件。将DiOC2(3)溶于无水DMSO配制成100 mM的储液：向20mg管中加入435 μL的无水DMSO，充分溶解。每次实验前，需将储液充分涡旋混匀。
开始实验前，将DiOC2(3)和CCCP恢复至室温。
（1）用预热的培养基、磷酸盐缓冲液或其他缓冲液重悬细胞，使细胞最终密度为1×106个/mL。
（2）设置对照，向管中加入1μL CCCP溶液至终浓度为50 μM，37℃孵育5 min。
注：CCCP可以和DiOC2(3)同时添加。为了获得不同细胞类型的最佳效果，可能需要滴定CCCP。
（3）配置合适浓度的DiOC2(3)工作液，加入工作液至终浓度为50 nM，37℃孵育15-30min。如果进行其他标记，如用Annexin V结合物标记，请执行步骤2.1；如果不需要其他染色，请继续执行以下步骤。
（4）（可选）清洗细胞一次，向每个细胞管中加入适量预热的PBS缓冲液。
（5）1000 rpm离心5 min。
（6）向每个管中加入500 μL PBS缓冲液，轻弹管壁使其重悬。
（7）使用YF488染料的发射滤光片在488 nm激发下进行流式分析。用CCCP处理的样品调节补偿。
2.Annexin V结合物额外标记
可以用额外的标记方法检测DiOC2(3)染色后细胞的凋亡及生存状态。如用Annexin V–APC标记：
（1）向步骤1.3的细胞中加入适量预热的PBS缓冲液洗涤细胞一次。
（2）1000 rpm离心5 min，然后重悬于100μL 1×Annexin结合缓冲液中。
（3）加入5μL Annexin V结合物（如Annexin V-APC）。
（4）37℃孵育15 min。
（5）加入400 μL Annexin结合缓冲液。
（6）用适合于YF488/PI和YF633染料的发射滤光片在488 nm和633 nm激发下进行流式分析。
注意事项
1、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
