MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨亚克隆14）细胞成骨分化试剂盒使用说明下载
产品介绍
该培养基是专门针对MC3T3-E1 Subclone 14细胞系的成骨诱导分化使用。该培养基考虑到MC3T3-E1 Subclone 14的独特特性，对其分化促进剂的配方进行了特别优化，以增强其成骨分化的效率。
注意：本产品仅提供给进一步科研使用，不可用于临床治疗等其他用途。
MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基试剂盒套装成分
| MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化试剂盒套装成分 | 货号 | 体积 |
| MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化试剂盒 | IMC-018 | 1 Kit |
MC3T3-E18ubclone14小鼠颅顶前骨亚克隆14专用培养基 | IM-M080-1 | 178 mL |
MC3T3-E1 Subclone 14成骨分化专用胎牛血清(FBS) | IMC-101-500 | 20 mL |
MC3T3-E1 Subclone 14成骨分化添加物 | IMC-018-A | 2 mL |
茜素红 | IMC-901 | 10 mL |
| 明胶 | IMC-902 | 10 mL |
质量控制
通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测。
通过渗透压、pH检测。
通过产品性能检测
处理原则
1.严格的无菌环境。务必保证实验室整体和操作区域的清洁。
2.规范的操作方式。请按照产品说明书描述的方式操作，严格控制变量，做好对照实验。
3.各成分需按照保存条件妥善存放，并尽快使用。
4.若短期内无法用完整套培养基，应按套装内各成分体积比例现配现用。
产品稳定性及保存条件
1.套装内所有成分均需避光保存。
2. 套装内的完全培养基，需放置4℃保存，保质期为1个月；若能保证培养条件稳定，容器密封性能良好，避免冷热交替，则保质期可适当延长，但不得超过45天。
3.所有产品请于保质期内使用；过期的成分可能严重影响培养效果
分化培养基的配制
所需材料
1.MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基试剂盒
2.清洁、无菌、质量稳定的一次性耗材（移液管、移液器吸头、离心管等）
3.洁净的封口膜
4.铝箔纸等避光材料
操作步骤
1.用75%医用酒精仔细擦拭所有成分外包装。在超净台内打开包装。
2.将添加物全部加入细胞基础培养基（以下简称基础培养基）中。
3.取少量基础培养基，洗涤各瓶、管，尽可能将所有成分全部加入基础培养基中。
4.拧紧基础培养基瓶盖，轻柔并充分摇匀。
5.用封口膜密封瓶口，用铝箔纸包裹瓶身，并标注名称、配制日期等信息。
特别提醒
1.若短期内无法用完全部培养基，我们建议分批配制；请按照套装内各成分比例，配制所需量；但剩余的成分必须严格按照各自的保存条件妥善保存，并且不可多次冻融。
2.MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基试剂盒内的所有成分都严格控制无菌，一般情况下我们不建议再次除菌。若配制过程有污染风险，可将完全培养基过滤除菌。
3.配制完成的成肌诱导分化培养基，需在24h内使用。建议计算分化培养基用量，现用现配。
诱导分化操作流程
所需材料
1. MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基试剂盒
2.Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）
操作步骤
注意
1)本操作规程以十二孔板为例，请根据实际情况选用合适的培养容器；
2)为减少诱导过程细胞漂起、不贴壁，建议可使用明胶包被培养容器；
3)诱导培养基在使用前均需预热至37℃。
1.将待诱导的MC3T3-E18ubclone14小鼠颅顶前骨亚克隆14细胞按照1×104cells/cm2的细胞密度接种于12孔板中，每孔加入1mL普通完全培养基。
2.细胞置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。
3.当细胞融合度达到70%-80%时，小心地将孔内完全培养基吸走，向12孔板中加入0.5mLMC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基。
4.每隔1天换用新鲜的MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基。
5.诱导14~21天后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
茜素红染色分析
所需材料
1.Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）
2.明胶溶液
3. 茜素红染色液
操作步骤
注意：
1)为防止细胞脱落，所有操作尽可能轻缓；
2)如果染色效果较差，可适当延长染色时间；
3)请确认出现多核骨细胞后再进行染色。
1.成骨诱导分化结束后，吸去12孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用1×PBS轻柔洗涤2~3次。
2.每孔加入0.5 mL1×PBS 之后并逐滴加入等体积的多聚甲醛，室温固定30min。
3.吸去固定液，加入新鲜甲醇溶液固定细胞5min，然后使用甲醇溶液漂洗细胞1次。
4.吸取固定液，晾干培养板，使用茜素红染色液进行染色。
5.加入浸泡0.5 mL多聚甲醛10min；
7.去除染色液，加入PBS洗涤1-2次, 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果；
8.染色后的12孔板用封口膜封装后，置于4℃可保存2周
染色效果图
