γδT细胞高效扩增试剂盒

货号：IMC-015

价格：

5000元

元

规格：

货期：现货

本试剂盒是一款高效活化诱导γδT 细胞的活化试剂，含有优质级细胞因子，不含动物源成分，不含滋养层细胞。适用于人外周血 PBMC 的γδT 细胞诱导培养,为γδT 细胞培养提供极为简便的操作方案。

适用于外周血样本培养；

培养 14 天后大多样本纯度可达 70～90%，细胞数扩增高达 200 倍以上。

包装规格：1L×2，1mL×3 支；

储存条件：2~8℃保存；

有效期：12 个月；

1. 试剂：免疫细胞无血清培养基(1000mL*2)；γδT 细胞培养试剂盒；淋巴细胞分离液；生理盐水；DPBS 等；

2. 耗材：TC 处理 75cm² 、175cm² 细胞培养瓶；细胞培养袋；一次性 50mL 注射器；移液管；离心管等。

表1.试剂盒组成信息

产品货号	产品名称	产品规格	储存条件
IMC-015-BM	γδT细胞基础培养基(γδT cells Basal Medium)	1 L*2	4°C,1个月
IMC-015-A	γδT添加剂A	1 mL	-20°C,1个月
IMC-015-B	γδT添加剂B	1 mL*2	-20°C,3个月

1. 血浆制备：

1.1. 将 50mL 血液平均倒入 2 个 50mL 离心管中，700xg 离心 15min，吸取上层血浆（取至距

下层红细胞层约 0.5～1cm 处）至 50mL 离心管中，于水浴锅中 56℃灭活 30min；

1.2. 置于冰箱中冷却，1200xg 离心 10min，取上清 4℃保存备用；

2. 单个核细胞制备

2.1. 取上一步离心后下层细胞，加 DPBS 或生理盐水 1:1 稀释混匀，分别缓慢加至 2 支装有 15mL 人淋巴细胞分离液的 50mL 离心管中（界面分层应清晰），室温下 800xg 离心 20min（慢升慢降）；

2.2. 离心后取单个核细胞层（白膜层）至新的 50mL 离心管中,加入 DPBS 或生理盐水定容到 50mL，400xg 离心 8min；

2.3. 弃上清，DPBS 或生理盐水重悬细胞并定容到 50mL，取样计数后，400xg 离心 8min。

3. 完全培养基配制：

3.1 取两瓶无血清培养基分别加入γδT添加剂B 1 支，混匀备用。

4. 细胞诱导活化、增殖：

4.1. Day0：取 20mL 含 10%自体灭活血浆、完全培养基重悬单个核细胞，调整细胞密度 1.5~ 2.0×10⁶/mL，加入本试剂盒中 γδT添加剂A支混匀，将细胞悬液转移至 75cm² 培养瓶中，于 37℃、5.0% CO₂ 培养箱中培养；

4.2. Day3：根据细胞生长情况，加入20mL 完全培养基，1mL 自体灭活血浆，总体积约为40mL ；

4.3. Day5：转瓶，视细胞生长情况，将 75cm² 培养瓶中的细胞转移至一个 175cm² 瓶培养（若贴壁细胞较多可加入新鲜完全培养基及灭活自体血浆继续培养），加入完全培养基 60mL及灭活自体血浆 6mL，总体积约为 100mL；

4.4. Day7：转袋，将 175cm² 培养瓶中的细胞转入 1 个细胞培养袋中，加入 150mL 完全培养基（若贴壁细胞较多可加入新鲜完全培养基及灭活自体血浆继续培养）及剩余灭活自体血浆，总体积约为 250mL；

4.5. Day9：视细胞生长情况，加入完全培养基 350mL，总体积约为 600mL；

4.6. Day11：视细胞生长状态，加入完全培养基 600mL，总体积约为 1200mL（或将培养袋中细胞悬液分为两袋，每袋加入完全培养基 300mL）；

4.7. Day13：视细胞生长情况，加入完全培养基 800mL，总体积约为 2000mL；取样质检及流式检测；

4.8. Day15：收获γδT 细胞。

5. 参考补液流程：