Cat.No | 产品组分 | 规格 | 储存条件 | 保质期 |
IMC-021 | 293 瞬转表达系统试剂盒 | 1kit | 2~8℃避光 | 12个月 |
产品简介
293瞬转表达系统包含基础培养基CD 293 无血清培养基与补料培养基CD 293 Feed为完全化学成分限定培养基，均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型HEK293细胞的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达。
产品组成
Cat.No | 产品组分 | 规格 | 储存条件 | 保质期 |
IMC-021-M | CD 293 无血清培养基 | 500mL | 2~8℃避光 | 12个月 |
IMC-021-A | CD 293 Feed | 100mL | 2~8℃避光 | 12个月 |
IMC-021-B | HEK293 Enhancer | 5mL | 2~8℃避光 | 12个月 |
IMC-021-C | 293 PEI Pro | 0.5 mg/ml，5mL | -20℃ | 12个月 |
使用说明
〔关键参数〕 转染时细胞密度：3~5 E6 cells/mL，质粒DNA：1.3 mg/L， 293 PEI Pro：4 mg/L
细胞传代
1.0.3 E6 cells/mL接种，3天传代一次，当细胞倍增时间不高于对照培养基110%时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤；
2. 转染前一天将细胞密度调整到1.5~2.0 E6 cells/mL之间，使得第二天转染时细胞密度在3~5 E6 cells/mL之间。
质粒与PEI预处理
以20 mL培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算）
1. PEI：取出160uL 293 PEI Pro溶液（即终使用浓度是4 mg/L)，再加入1mL CD 293 无血清培养基混合均匀；
2. 向上述稀释后的PEI中加入26ug的质粒DNA（即质粒DNA用量1.3 mg/L)，并混合均匀；
3. 上述混合物静置~20min。
转染
1. 用新鲜培养基调整细胞密度至3~5 E6 cells/mL (这点尤为重要）；
2. 缓慢滴加上述PEI与质粒DNA的混合物，摇动摇瓶使混合物均匀展开；
3. 摇瓶放入摇床中，培养时间记为Day0，转染结束。
补料培养
1. 转染后~24h内补加0.4%的HEK293 Enhancer （仅此一次，且只分泌性蛋白或抗体需要添加，膜蛋白无需加HEK293 Enhancer）和7%的CD 293 Feed；
2. Day4 补加一次7%的CD 293 Feed和3g/L的葡萄糖 （备注：如只培养5天，可Day4不处理）；
3. 活率≤70%即可结束培养或其他指定培养时间。加料量和加料频率可针对性的做优化。
温度及其他参数
1. 温度37℃，不降温；
2. 摇床转速120rpm，50mm振幅，5-8% CO2。
注意事项
1. CD 293 Feed开封后建议在3个月内用完。
2. 液体培养基若出现析出或者浑浊等现象，请停止使用。
3. 为确保使用效果，建议搭配Expi293F 细胞。
4. 293 PEI Pro -20℃保存一年，且可反复冻融，2-8℃有效期1个月。
