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细胞贴壁后大面积脱落的原因

时间:2021-09-02 09:56:56 点击:2858次

【参考答案】

如下原因应该考虑:

1.缓冲液的pH值

2.缓冲液从冰箱内拿出后要室温恢复温度才用,过冷的缓冲液冲洗会导致细胞脱落

3.细胞培养时间过长或传代次数过多

4.你的细胞长的太满了,细胞长到80-90%就要处理

【参考答案】

你所见到的白色细胞团,所谓象菌落一样,是即将死亡的细胞,细胞用平衡盐溶液冲洗的时候,脱落下来的都是你的细胞,只能说你的细胞已经长过了,过了对数生长期,生长的活力和帖壁的能力已经下降

【参考答案】

估计是你的溶液出问题了或者是细胞长得太密了。你同时培养的其他瓶里的细胞怎么样?如果都飘起了还是要考虑所用液体(培养基及所用缓冲液)的问题,如果就这一瓶细胞这样子,估计是细胞太密了,就死了。

【参考答案】

应该是细胞状态不好所致。宜及时换液、及时传代。

【参考答案】

1、细胞密度太低了,你传代或者冻存密度太低(从你图片上看),细胞与细胞之间相互因子不够,必然脱落。

建议:不要忙于传代或者冻存,适当地提高细胞密度试试看。

2、降低消化液密度,估计对细胞损伤较大,影响其贴壁。

3、如果上述方式还不行,在培养瓶底部适当地涂抹胶原,包被过的培养瓶会有助于细胞贴壁。

【参考答案】

我怎么感觉是污染了呢。我做原代也出现过这宗细胞大面积脱落的情况,我看你的倒置显微镜下,感觉是污染了呢。

1.一般如果是胰酶消化的问题,那细胞是圆圆的不贴壁,一换液全没了,这个问题我做原代时遇到过,我原来用0.25的胰酶消化表皮细胞,消化后是根本不贴壁,而不是表现为贴壁后大面积脱落。后来换的0.05的消化,正常贴壁生长。

2.如果是细胞密度太稀的话,那就是单个细胞不长,或者长得很慢,以前看过一个报道说细胞也是具有孤独感的,如果细胞太稀是不会体现大面积脱落的,应该是细胞增殖慢,且内部出现黑点,细胞老化才是。

3。关于包被表衬培养皿,一般直接购买的corning或者nunc这些进口的耗材培养表面都是经过处理的,易于细胞贴壁的。也有使用一些帮助贴壁的,但是那是特殊细胞,比如包被鼠尾胶来帮助肝原代细胞贴壁,包被多聚赖氨酸来帮助神经元贴壁。如果你原来做不用包被就能很好的贴壁的话,那我觉得和包不包被没有很大关系。

【参考答案】

结论:细胞生长状态差。

建议用胶原酶代替胰酶,以降低对细胞的损伤。

【参考答案】

培养箱污染是细胞污染的重要原因。正确处理方法是拆除培养箱内所有金属板、金属支架和风扇,全部用纱布沾70%酒精(要拧干)擦洗。你很可能会看到风道内(可沿风扇追踪)的大量霉菌。

甲醛熏蒸不能解决问题,因为风道内可能有大量有机物残留(灰尘、棉纤维、霉菌),很容易再次长菌。

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