THP-1细胞收到货有可能是复苏活细胞T25瓶,或者冻存管细胞,不同运输形式的细胞处理方式不同。
THP-1细胞状态图
【参考建议】
T25瓶方式
观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶的THP-1细胞置于37度培养箱放置2-4h,以便稳定细胞状态,等到细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
THP-1细胞传代培养步骤操作
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心3-5min分钟,弃去上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
备注:第一次传代时,若培养基中有细胞碎片,则将细胞悬液装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀,按1:1分到新的装有10mL新鲜培养基的培养皿中,置于培养箱中培养。
冻存管
收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏,如果不复苏,放进-80℃冰箱暂存或放进液氮长期保存。如果复苏,按照常规复苏步骤操作
THP-1细胞复苏步骤操作
将含有1 mLTHP-1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1 mL 10%FBS 1640培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜。第二天检查细胞密度。
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