细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境,使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。在培养细胞时需要用到各种细胞培养耗材,如培养器皿、培养瓶或者多孔培养板来培养细胞,那么不同规格的培养瓶、培养皿、多孔培养板需要加多少培养基及可获细胞量是多少呢?
培养器皿主要有培养瓶、培养皿、多孔培养板这三种。
各种培养瓶、培养皿规格及加液量
细胞培养皿
培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。培养皿材质基本上分为两类,主要为塑料和玻璃的,玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的可能是聚乙烯材料的,有一次性的和多次使用的,适合实验室接种、划线、分离细菌的操作,可以用于植物材料的培养。
它最初由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的细菌学家朱利斯·理查德·佩特里(Julius Richard Petri,1852-1921)于1887年设计,故又称为“佩特里皿”。培养皿质地脆弱、易碎,故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。使用完毕的培养皿最好及时清洗干净,存放在安全、固定的位置,防止损坏、摔坏。
常见的玻璃或塑料培养皿,可以用于装取、分离、处理组织,也可以用于细菌毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。常见规格为10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
细胞培养皿规格及加液量
产品规格 | 高度 | 生长面积 | 建议上液量 |
35mm | 10mm | 8cm2 | 3ml |
60mm | 15mm | 21cm2 | 5ml |
100mm | 20mm | 55cm2 | 10ml |
150mm | 25mm | 148cm2 | 30ml |
245mm(方形) | 25mm | 500cm2 | 100ml |
细胞培养瓶
常见的为玻璃培养瓶,用于培养及繁殖细胞。国产的规格以容量(ml)标识,进口的则以底面积(c㎡)表示。
细胞培养瓶常见的规格:培养面积25cm²(容量50ml)、培养面积75cm²(容量250ml)、培养面积175cm²(容量600ml)、其他还有12.5cm2,25ml;300cm2,850ml等。
细胞培养瓶根据材质可以分为玻璃的和塑料的,底部形状有正方形、长方形、三角形等,根据瓶子容积有5至500ml供选择。另外,表面经过特殊改性处理后,可以让细胞更好的进行贴壁培养,这样根据细胞贴壁面积又可以分为25~175cm2多种。
培养瓶的瓶颈也有多种样式,有直颈、斜颈、角度颈、三角形、矩形。
1)直颈:可以减少培养基因晃动而流到瓶盖里;
2)斜颈:易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体;
3)角度颈:移液管或者细胞刮易于进入瓶身,并且可减少培养基因晃动而流到瓶盖;
4)三角形:移液管或细胞刮更易达到瓶角,宽底增加稳定性;
5)矩形:斜颈的矩形培养瓶瓶底至瓶颈是一个坡度设计,易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体,大部分斜颈瓶都有一个裙边以增加稳定性。直颈和角度颈的矩形培养瓶整个瓶底都是培养面,节省空间并减少培养基因晃动而流到瓶盖。
细胞培养瓶规格及加液量
规格 | 建议上液量 |
25cm2,矩形,斜颈,透气盖 | 5ml |
75cm2,矩形,斜颈,透气盖 | 15ml |
150cm2,矩形,斜颈,透气盖 | 30ml |
175cm2,矩形,角度颈,透气盖 | 35ml |
225cm2,矩形,斜颈,透气盖 | 45ml |
细胞培养板
细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等。
根据材质的不同的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。
细胞培养板规格及加液量
规格 | 单孔面积 | 体积 | 建议上液量 |
6孔板 | 9.5cm2 | 16.5ml | 2.5-3.0ml |
12孔板 | 3.9cm2 | 6.5ml | 2.0ml |
24孔板 | 1.75cm2 | 2.9ml | 1.0ml |
48孔板 | 1.0cm2 | 1.7ml | 0.5ml |
96孔板 | 0.32cm2 | 0.37ml(平底) | 0.1-0.25ml |
96孔板 | 0.35cm2 | 0.30ml(U-底) | |
96孔板 | 0.28cm2 | 0.23ml(V-底) | |
384孔板 | 0.1cm2 | 0.12ml | 0.06ml |
1536孔板 | 0.02cm2 | 0.012ml | 0.015ml |
4孔板 | 16.0cm2 | 132x82 | 5.0ml |
8孔板 | 8.6cm2 | 132x82 | 3.0ml |
4孔板 | 21.8cm2 | 128x86 | 5.0ml |
细胞培养板规格及加液量
培养器皿 | 底面积(cm2) | 加培养液量(ml) | 可获细胞量 |
96孔培养板 | 0.32 | 0.1 | 105 |
24孔培养板 | 2 | 1.0 | 5x105 |
12孔培养板 | 4.5 | 2.0 | 106 |
6孔培养板 | 9.6 | 2.5 | 2.5x106 |
4孔培养板 | 28 | 5.0 | 7x106 |
3.5cm培养皿 | 8 | 3.0 | 2.0x106 |
6cm培养皿 | 21 | 5.0 | 5.2x106 |
9cm培养皿 | 49 | 10.0 | 12.2x106 |
10cm培养皿 | 55 | 10.0 | 13.7x106 |
25cm塑料培养瓶 | 25 | 5.0 | 5x106 |
75cm塑料培养瓶 | 75 | 15-30 | 2x107 |
25cm玻璃培养瓶 | 19 | 4.0 | 3x106 |
100cm玻璃培养瓶 | 37.5 | 10.0 | 6x106 |
250cm玻璃培养瓶 | 78 | 15.0 | 2x107 |
2500cm旋转培养瓶 | 700 | 100-250 | 2.5x108 |
24孔板: PLL 100-200μl (200μI)(即可,铺板2h后,吸出PLL (回收)),PBS冲洗2次,晾干备用或不晾干直接用。加培养液量1ml,注意调整细胞密度。
25cm2(5m)→(1:2) 50cm2(10ml)一(1:3)75cm2(15ml)
2cm2 (1ml) →1/25—1/40 总细胞悬液
96孔板:PLL20-40μl(40μl)即可,铺板2h后,吸出PLL(回收),PBS冲洗2次,晾干备用或不晾干直按用。加培养液量0.1ml-0.2ml,注意调整细胞密度。
25cm2 (5ml)→(1:2) 50cm2 (10ml)一(1:3) 75cm2 (15ml)
0.32cm2 (0.1-0.2ml) →1/150— 1 /250总细胞悬液
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