细胞传代是将某一细胞系在一定的培养条件下，经过一段时间的增殖后，把培养的细胞分离出来，重新种植到新的细胞培养皿中，进行新一轮的培养，以达到无限次增殖的目的。细胞传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞随着培养时间的延长和细胞不断分裂，细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止，且也会因营养物不足和代谢物积累而不利于细胞生长或发生中毒。因此，细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释，分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。
细胞传代作为一种常规的实验操作，不但可以扩大细胞培养的数量，同时也可以避免细胞因进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。我们知道细胞生长一般经历4个时期：潜伏期、对数生长期、平台期和衰亡期。所以为了让细胞保持在对数生长期，维持细胞旺盛的分裂能力，这时候就需要进行细胞传代。
不同类型细胞传代方法
细胞传代要在严格的无菌条件下进行，并且根据不同细胞采取不同的方法：
贴壁生长的细胞，用消化法传代。
部分贴壁生长但贴壁不牢固的细胞，可以采用直接吹打传代。
悬浮生长的细胞，可以采用直接吹打或离心沉淀后再分离传代，或直接用自然沉淀法吸除上清后，再吹打传代。
材料和器材
材料：培养瓶/皿，离心管，移液管，移液器，废液缸，75%酒精，所需培养细胞
药品：培养基，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，PBS缓冲液，青链霉素双抗
仪器：CO2培养箱，倒置显微镜，超净台
贴壁细胞的消化法传代方法
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
3.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
温馨提示：吹打时动作要轻柔不要用力过猛，同时尽可能不要出现泡沫，这些都会对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。
悬浮细胞的传代方法
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
半悬浮细胞的传代方法
1.收集细胞培养上清：抽出瓶中的培养基和悬浮的细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清，细胞重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
2.剩下贴壁的细胞，用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗细胞1次。
3.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加少量培养基终止消化。
4.按3mL/瓶补加培养基，轻轻打匀吹下细胞后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
5.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养中。
细胞传代实验注意事项
在细胞传代的过程中，需要注意以下几个方面
1.无菌环境
在细胞实验之前要注意无菌环境的建立，紫外杀毒灭菌，酒精消毒都是十分有必要的。
2.镜下检查
镜下检查结果非常重要，镜检的结果非常重要，要根据你自己的观察进行细胞密度的识别，从而进行细胞传代比例的确定，进行更好的细胞数量的控制，如果实验要求比较高，需要细胞计数板计数。
3.过火焰
记住，所有开瓶的东西都要进行过酒精灯外焰，瞬间高温进行灰尘的固定。这样会大大减少染菌几率。
4.移液工具
很多人对于移液工具都有偏好，不好说什么就是正确的。但是从无菌角度。使用移液管比微量移液枪减少污染的几率要高。希望大家能用移液管。
5.交叉污染
混匀细胞悬液和移取培养基以及血清的工具要分开;还有就是胰酶和血清也要严格分开，否则容易造成交叉感染，使细胞增加染菌几率。
6.消化时间
对于贴壁细胞，我想要大家注意的是胰酶消化时间，对于常用0.25%的胰酶最好把消化时间控制在30s内，必要是最好镜检看一下是否脱壁。但是这是一个经验活，要多积累经验。
7.细胞混匀
在操作细胞传代前，应先熟悉细胞培养的基本知识，例如细胞培养的基本设备、培养材料和培养方法，以便为细胞传代提供良好的培养条件。此外，应及时记录细胞传代的情况，以便掌握细胞传代过程的变化情况，及时发现和解决问题。
传代培养几乎是所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长到一定密度都会因为接触抑制而停止生长，之后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需，但培养皿中的细胞很容易受到外界污染，培养液是营养富集的液体，可以支持细胞在其中生长，然而，水能载舟亦能覆舟，“好喝”的营养液，使得细菌们也能在培养液中快乐生长，同时离体培养的细胞也是各类病毒、支原体等的大爱，因此，需要周全保护细胞“宝宝”们，以下所有操作要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
细胞传代是一个复杂而关键的过程，在操作时必须格外谨慎，以免出现意外情况。只有在熟悉细胞培养的基本知识的基础上，注意上述注意事项，才能够顺利完成细胞传代。
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