hESC（H9）人胚胎干细胞（STR鉴定正确）

ESC(H9)鉴定实验报告下载

hESC/iPSC Basal Medium 混匀配制成 hESC/iPSC 完全培养基，之后根据使用情况将培养基分装，封口膜封好，确保置于 4℃储存的培养基 2 周内使用完毕，其余培养基于-20℃冷冻保存，需要时提前于 4℃过夜解冻。

2）Matrigel铺板（以货号为354277的Corning® Matrigel®包被6孔板为例）

3. 将Matrigel放置4℃冰箱过夜解冻，当Matrigel完全解冻即可开始分装。 

注：在解冻时，将Matrigel放置冰箱内侧角落，切勿放在靠近冰箱门附近。

2.取 2 mL hESC/iPSC 完全培养基，加入 4μL hESC/iPSC Supplement C 使终浓度为 10μM，取 9mL 

DMEM/F12，加入 18μL hESC/iPSC Supplement C 使终浓度为 10μM，恢复至室温。

5. 吸除 6 孔板中 1 孔的 Matrigel 包被液，加入 2mL 含有 hESC/iPSC Supplement C 的hESC/iPSC 完全培养基。

6. 离心完吸弃上清，至留下 50μL 左右的上清，轻弹管底 3-4 下至细胞混匀在上清中，逐滴缓慢加入 1mL 含有     hESC/iPSC Supplement C 的 hESC/iPSC 完全培养基，轻弹管底 3-4 下混匀细胞，将这 1mL 细胞悬空滴加进 6 孔板的含有 hESC/iPSC Supplement C 的 hESC/iPSC完全培养基中。

7. 水平十字摇匀三次，置于37℃，5% CO₂浓度，饱和湿度的培养箱中，再次水平十字摇匀三次培养。

注：水平十字摇匀 3 次，左右两次+上下两次算一次。

2）传代hESC/iPSC（以6孔板为例）

图 1. hESC/iPSC完全培养基连续培养hiPSC细胞形态图：（A）和（B）分别为hESC(H9)细胞培养第 2 和 4 天时低倍镜hESC(H9)培养形态图示，（C）和（D）为培养至第 2 和 4 天时的高倍镜hESC(H9)培养形态图。

1. 传代条件：① 细胞汇合度达85%左右（如图1(C-D)所示），一般情况下每3-4天传代；

3. 将 Matrigel 包被的 6 孔板，hESC/iPSC Passage Solution，DPBS提前放置生物安全柜中约 1 小时恢复至室温（~25℃）。

4. 根据传代接种的孔数准备 2 mL/孔的hESC/iPSC完全培养基，加入hESC/iPSC 

Supplement C终浓度为 10uM，恢复至室温（~25℃）。

6. 加入 1 mL/孔的 hESC/iPSC Passage Solution使溶液完全覆盖孔底。

7. 置于 37℃培养箱中孵育 7-9 min。

注：① 消化 7-9 min后镜下观察细胞变化，当大部分细胞变亮变圆，且细胞尚未脱离基质，若大部分细胞仍未变亮，则需要延长消化时间，不超过 10min；

② 保持 6 孔板与培养箱金属隔板直接接触，使 6 孔板受热均匀，不要叠放。

8.消化时吸取 6 孔板中的 Matrigel 溶液，加入预温的 hESC/iPSC 完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C 2 mL/孔。

9.消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜，避免震荡摇晃细胞，倾斜并吸除hESC/iPSC Passage Solution。及时加入 1 mL/孔预温的 hESC/iPSC 完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C，将细胞吹下来。

注：① 加 hESC/iPSC 完全培养基 + hESC/iPSC Supplement C 时，可轻柔吹打细胞不能超过 2 次，避免反复吹打；有部分细胞（10%～15%）未脱离基质是正常现象，若有大量细胞未脱离则需延长消化时间（< 10min）。

10.把这一毫升细胞悬液悬空滴加入板里的培养基，每孔 3-5 滴。在 6 孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人，水平十字摇匀 3 次。

注：可将传完代后的细胞在镜下观察细胞密度，根据密度调整是否需要多加细胞滴。

11.置于 37℃，5% CO₂ 浓度，饱和湿度的培养箱中，再次水平十字摇匀 3 次，不要叠放。

12. 18-24 小时后换新的 hESC/iPSC 完全培养基，此后每天换液，第 4 天继续传代/冻存。

注：传代后隔天算第 1 天。

 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 

2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

1.收到细胞后，及时拍照记录有无漏液、浑浊或瓶身破损现象。
2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。          
 4.  仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

7.混匀含有终浓度为 10uM 的 hESC/iPSC Supplement C 的 hESC/iPSC Cryopreservation Solution，每孔加入 

1 mL，轻柔吹打，随后吸取细胞悬液加入 1.5/2 mL 冻存管中。

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发；

3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发；

4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发；

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发；

6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发；

7.视具体情况而定。

1.客户操作造成细胞污染，不重发；

2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发；

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发；

7.视具体情况而定。