逸漠B-27 Serum-Free Supplement (50×)，无抗氧化剂说明书下载
产品简介
B-27 Serum-Free Supplement（50×），即B-27无血清添加剂（50×），B-27是一种最常被引用的神经细胞培养添加剂，是一种优化的无血清添加剂，用于支持胚胎、出生后和成年海马神经元和其他中枢神经系统（CNS）神经元的生长和活性维持。B-27无血清添加剂以50倍工作液提供，旨在与神经基底培养基一起使用，神经基底培养基用于神经细胞培养，无需星形胶质细胞饲养层。
在神经元基础培养基中使用B-27添加剂，用于培养产前和胚胎神经元，以获得优化的活性和长期的存活率。
在神经元基础培养基中使用B-27添加剂，用于培养神经来源的肿瘤细胞系，可有效地保证其活性。
在DMEM/F12培养基中添加B-27添加剂，已被证明可支持扩增来自小鼠胚胎纹状体和中脑的EGF响应性的前体细胞。
本产品配方中去从标准配方中去除了全部5种抗氧化剂，以利于在氧化应激及损伤、氧自由基对神经损伤和凋亡的研究中排除抗氧化剂的干扰。
产品信息
使用说明
1. 完全培养基制备
（1）置于4℃解冻本产品。
（2）在使用前无菌添加2%本产品和0.5 mM L-谷氨酰胺至神经元基础培养基，配制成神经元完全培养基（注：下文中出现的“神经元完全培养基”即指此种添加了B-27添加剂和L-谷氨酰胺的神经元基础培养基）注意：剩余的本产品可以等分成工作体积，并储存在-30~-5℃。在以后的试验中根据需要解冻相应体积的本产品。避免反复冻融。
（3）对于原代海马神经元培养，神经元完全培养基（由前述步骤制备）需要额外补充25μM的L-谷氨酸，在培养的第4天以后的换液中应不再添加谷氨酸。配置好的完全培养基，可于2-8℃的避光保存一周。
2. 细胞培养步骤
下列步骤已在大鼠胎儿原代海马和皮层神经元，以及神经母细胞瘤细胞系中测试。
（1）用无菌的冷的0.05 mg/mL多聚赖氨酸水溶液包被培养表面（玻璃或细胞培养级塑料），每平方厘米表面使用0.15 mL，在室温下保温1 h。
（2）去除多聚赖氨酸溶液，并用无菌蒸馏水冲洗两次（须彻底清洗，因为多聚赖氨酸对细胞有毒性）。在超净工作台中打开培养板的盖子通风，直到每个孔都完全干燥。培养板干燥后可以立即使用或在4℃最多保存2周。
（3）根据标准实验室程序或随细胞提供的说明书分离原代的大鼠神经元或解冻冻存的原代大鼠神经元。
（4）在预热的（37℃）神经元完全培养基中（如前所述的方法制备）接种细胞，建议的细胞密度为160个细胞/mm2，或必要时使用自行优化的细胞密度。注意：对于海马神经元，培养基中须添加25μML-谷氨酸，参见“完全培养基的制备”。
（5）在36℃至38℃，含5%二氧化碳的潮湿环境中培养（使用自然空气也是可接受的，但推荐含9%氧气和5%二氧化碳的气体环境）。
（6）培养4-24小时后，更换一半体积的新鲜培养基，继续在培养箱中培养。
（7）对海马神经元以外的细胞：在接种4天后，更换一半体积的新鲜的完全培养基，之后每三天重复一次。对海马神经元：接种三天后，用不含L-谷氨酸的新鲜培养基更换一半体积的培养基。之后每三天重复一次。注意：在完全培养基中添加25 µM 2-巯基乙醇，可改善海马神经元的长期存活率。
3. 分离原代大鼠胚胎神经元
下列程序推荐用于培养受精18天的大鼠胚胎海马神经元和大脑皮层神经元。
（1）从受精18天的大鼠胚胎中分离大脑皮层和双侧海马。
（2）在预置了Hibernate-E完全培养基的锥形管中收集所有的组织。放置，直到所有的组织都已解体。
（3）使组织沉积在管的底部，然后小心地去除上清液， 只留下刚好可覆盖组织的最少量的培养基。
（4）在不含钙离子的Hibernate-E培养基中，使用2 mg/mL过滤灭菌的木瓜蛋白酶溶液，在30℃酶解组织大约30 min，其间每5 min轻摇锥形管以帮助降解。每对海马组织使用2 mL酶溶液。
（5）加入两倍体积的Hibernate-E完全培养基以恢复二价阳离子的浓度，停止酶解。
（6）使未解离的组织沉降至管底（约2 min），然后把上清液转移到15 mL离心管中，以150×g离心5 min。
（7）在1 mL神经元完全培养基中重悬沉淀物，取一小份（例如10μL）进行细胞计数。后续的操作按照“复苏和培养冻存的神经元”的第8-10步骤进行。
4. 复苏和培养冻存的神经元
重要提示：原代神经元细胞将会贴附在裸露的塑料或玻璃表面，建议事先用神经元完全培养基冲洗所有的塑料和玻璃器皿的内表面，以获得最高的回收率和产量。由于细胞从冻存状态复苏时极其脆弱，请在整个操作过程中不要震荡或离心细胞。我们建议每次只解冻一管细胞。务必减少从液氮中转移冻存管到37℃水浴中的操作时间。细胞从液氮罐到水浴的运输过程中，可在冰桶中放少量液氮，将细胞置于这个冰桶中来进行。
（1）在解冻细胞之前，用神经元完全培养基冲洗无菌的15 mL锥形管，然后在超净工作台中通风晾干。
（2）从液氮中取出冻存管时可稍微拧松管帽以释放压力，然后再拧紧。
（3）在37℃水浴中轻柔搅拌冻存管以快速解冻细胞（小于2 min）。当观察到冻存管中只有很少量的冰晶存在时（触摸冻存管仍然感觉是冷的）从水浴中取出。
（4）在超净工作台中用70 %的异丙醇消毒冻存管。在工作台台面上轻敲冻存管以使管内液体沉降到管底。
（5）使用事先用神经元完全培养基冲洗并干燥过的1 mL吸头极其轻柔地将细胞转移到事先冲洗并干燥的15 mL锥形管中。
（6）用1 mL预热的神经元完全培养基冲洗冲洗冻存管，以每秒一滴的速度极其缓慢地加入到15 mL锥形管中的细胞里。每加一滴都轻柔地转动锥形管一次。不要一次即把全部培养基加到锥形管中。
（7）慢慢地逐滴加入另外2 mL预热的完全培养基，使管内的液体体积为4 mL。用1 mL吸头轻柔地混合液体，注意不要造成任何气泡。
（8）用一个事先冲洗干燥过的吸头吸取10μ
产品优势
(1)优质的类器官生长和分化
B-27 Serum-Free Supplement提供了细胞所需的抗氧化剂、蛋白、维生素和脂肪酸。能维持类器官的健康生长，支持类器官在体外环境中表现出类似于体内的特性。
(2)稳定性和一致性
B-27 Serum-Free Supplement经过精细的优化和质量控制，保证了每一批产品的稳定性和一致性，无血清成分，细胞状态一致性更高，分离、培养效果更稳定。
(3)多种类器官和细胞适用
经多种类器官的培养测评，该无血清添加剂系列产品广泛适用于肠道、食道等正常组织、各类肿瘤组织类器官和细胞的体外培养。
(4)简化培养基配制流程
直接添加B-27 Serum-Free Supplement到基础培养基中，简化了实验流程，节省时间和资源。
产品测试结果展示
IMMOCELL的B-27 Serum-Free Supplement(50x) 已广泛在人正常类器官如人和小鼠肝、小肠、人结肠、鼠胆管器官和肿瘤类器官等体外模型，神经干细胞的培养以及HCC827、HEP3B、COV434等细胞的瘤球培养实验中进行了验证。
(1)小鼠神经干细胞培养
(2)肝类器官培养
(3)瘤球培养实验
注意事项
1.本产品经过严格除菌过滤，为无菌产品，必须在超净台内使用，以避免微生物污染。
2.本产品须尽量避免光照。本产品充分融解并混匀后，如有必要，可以适当分装后-20℃避光保存。短期内如果频繁使用，可以4℃避光保存，并建议在1-2周内用完。
3.本产品长时间存放可能会出现少量沉淀，可上下颠倒混匀，完全溶解后即可正常使用。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
