一、细胞基本属性 |
细胞名称 | 人原代γδT细胞 |
种属来源 | 人 |
组织来源 | 外周血 |
生长特性 | 悬浮生长 |
形态特征 | 圆形 |
背景介绍 | γδT细胞发现于1984年,主要在固有免疫和适应性免疫中起桥梁作用。1980年代是TCR的时代,α链和β链先被鉴定出来后,γ链和δ链也随后被鉴定出来,由γ链和δ链组成的T细胞则被称之为γδT细胞。我们常说的T细胞其实是指αβT细胞,占T细胞群体的65%~70%,其表面的T细胞受体(TCR)由α链和β链两条链糖蛋白链组成。γδT细胞占T细胞群体的0.5%~5%,其TCR由γ链和δ链组成,主要存在于上皮和粘膜组织,比如皮肤、肠道等。 |
产品规格 | 5×105cells/T25或1mL冻存管 |
培养基 | γδT细胞高效扩增试剂盒 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞代数 | 第1代 |
产品货期 | 2-3周左右 |
运输方式 | T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮) |
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、细胞培养操作 |
收货处理 | 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态,观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h,以稳定细胞状态 |
细胞复苏 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。 |
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 |
传代比例 | 首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
传代方法 | a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
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细胞冻存 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~ 1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考 客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 |
三、注意事项 |
重要提醒 | 1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
到货须知 | 1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
四、售后服务 |
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 |
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |