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hESC(H9)人胚胎干细胞(STR鉴定正确)
H9人胚胎干细胞图片
H9人胚胎干细胞图片
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H9人胚胎干细胞图片
H9人胚胎干细胞图片
H9人胚胎干细胞图片

hESC(H9)人胚胎干细胞(STR鉴定正确)

货号:IM-H199 来源:中国科学院分子细胞科学卓越创新中心

规格:1x106cells/T25或1mL冻存管 形态:贴壁生长,呈克隆状

培养基:hESC/iPSC细胞培养试剂盒

传代:1:2至1:3,每周 3次

培养环境: 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

价格:5000元

搭配培养体系

hESC(H9)人胚胎干细胞生长记录

  一、细胞基本属性
细胞名称hESC(H9)人胚胎干细胞
细胞别称hESC;H9;人胚胎干细胞
种属来源
组织来源人胚胎干细胞
生长特性贴壁生长
细胞形态克隆状细胞样
背景简介hESC(H9)细胞株来源于人胚胎干细胞,贴壁生长,呈克隆状,可在hESC/iPSC完全培养基中快速增殖,而边缘分化的细胞则在该培养基中生长较慢,从而选择性扩增并获得高纯度人多能干细胞。包装规格为1mL冻存管,含量为>1x106个/mL,且支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。人胚胎干细胞H9,曾用名WA09。每支细胞可复苏至一个T25,3至4天后会形成30至40个克隆。
STR位点D5S818: 11,12;D13S317: 9;D7S820: 9,11;D16S539: 12,13;vWA: 17;THO1: 9;Amelogenin: X;TPOX: 10,11;CSF1PO: 11。
细胞荧光检测

微信截图_20240621103233.jpg

人胚胎干细胞H9培养鉴定实验报告下载

细胞代数 10代以内
细胞规格1x106cells/T25或1mL冻存管 
支原体检测
保藏机构 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
培养基 hESC/iPSC细胞培养试剂盒
培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件无血清冻存液,液氮储存
细胞货期现货,1周左右
运输方式复苏发货(T25瓶免运输费用)/  冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递
特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主
  二、细胞培养操作
试剂准备1)hESC/iPSC完全培养基配制(500 mL)
1.在4℃条件下解冻hESC/iPSC Grouth Supplements A/B,勿在37℃培养箱/水浴锅解冻。
2. 参考表1在生物安全柜中,使用无菌移液管混匀下列成分配制成hESC/iPSC完全培养基,之后置于4℃储存,封口膜封好后2周内使用。
3. 有初培养需扩建的需求,建议先配置100 mL,保证2周内使用完毕。

hESC/iPSC完全培养基配置说明

2)Matrigel铺板(以货号为354277的Corning® Matrigel®包被6孔板为例)
A. 分装 Matrigel
1.货号354277的Matrigel,操作说明中不标注蛋白浓度,而是以Dilution Factor表示,如某批次的推荐Dilution Factor为278 μL,则表明278 μL可包被4块6孔板,分装数量=5 mL /0.278=17.98。
2. 准备18个无菌1.5 mL EP管,标记Matrigel日期、操作人;1mL无菌吸头;EP管架,均置于-20℃冰箱中预冷1小时。
3. 将Matrigel放置4℃冰箱过夜解冻,当Matrigel完全解冻即可开始分装。 注:在解冻时,将Matrigel放置冰箱内侧角落,切勿放在靠近冰箱门附近。
4.准备一个装满碎冰的冰盒,将解冻过的Matrigel、预冷的1.5 mL EP管及EP管架、1mL吸头放置于生物安全柜上。
5.混匀Matrigel,无菌分装于各个1.5 mL EP管中,并置于冰上。当吸头被堵塞可能导致分装体积不准时需要更换吸头。
6. 将分装后的 Matrigel 置于-20℃冰箱中保存。
B.铺板
1.取36 mL冷藏DMEM/F12于50 mL离心管中,准备4个6孔板,标记Matrigel、批号、日期和操作人。
2.1 mL无菌吸头置于-20℃冰箱中预冷1小时,取出一支冷冻的Matrigel(5mL)置于4℃冰箱解冻至完全化冻。
3.准备一个装满碎冰的冰盒,将解冻过的Matrigel、预冷的1mL吸头放置于生物安全柜上。
4.用预冷吸头向解冻过的Matrigel(5mL)加入1 mL冷的DMEM/F12并反复吹打解冻混匀。
5.吸出已解冻混匀的Matrigel加入离心管中剩余的DMEM/F12,使用10 mL移液管再次反复吹打混匀。
6.分装1.5 mL/孔于4个六孔板中,轻轻摇晃混匀。
7. 培养板置于室温1小时后即可使用,或置于4℃冷藏过夜,两周内使用。
复苏方法1)复苏hESC/iPSC(以6孔板为例)
1. 将水浴锅预热至37℃;并将Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(15~30℃)。
2. 取4 mL hESC/iPSC完全培养基,按照1:4000比例加入1 μL的hESC/iPSC Supplement C,恢复至室温(15~30℃)。
注意:不要在37℃水浴锅中预温培养基。
3. 取出1支冷冻的细胞置于37℃水浴锅手持轻轻摇晃,2 min内解冻,肉眼观察细胞悬液内冰晶即将完全消失时取出。
4. 75%酒精无尘纸擦拭冻存管表面,转入生物安全柜;将细胞悬液移到事先准备好的15 mL 离心管中,随后缓慢逐滴加入10mL DMEM/F12,过程中轻柔晃动混匀细胞,160g离心5 min。
5. 吸弃上清,加入预温的4 mL的hESC/iPSC完全培养基+hESC/iPSC Supplement C制备细胞悬液,尽量避免吹打。
注:可留20 μL上清液,轻弹管底,使细胞悬浮液更均匀,避免成较大细胞团。
6. 吸除6孔板中2孔的Matrigel包被液,将细胞悬液按照2 mL/孔接种到1个孔中。
7. 水平十字摇匀三次,置于37℃,5% CO2浓度,饱和湿度的培养箱中,再次水平十字摇匀三次培养。
8. 18-24小时后换新的hESC/iPSC完全培养基,之后每天更换培养基。
注:在hESC(H1)培养过程中,如果细胞的汇合度超过50%,建议更换培养基时,培养基的体积增加至3-4mL/孔。

表2:hESC/iPSC传代&培养操作试剂推荐用量

传代方法传代hESC/iPSC(以6孔板为例)
1. 传代条件:① 细胞汇合度达85%左右(如图1(C-D)所示),一般情况下每3-4天传代;
② 细胞汇合度较低,生长密度分布不均匀。
注:即使克隆团较小、汇合度不足,也建议不要连续培养超过5天。
2.传代比例:可根据细胞生长状态和实验需要按1:5~1:12的比例进行传代,如果细胞正常,克隆团汇合度85%,大小均匀(如图1(C-D)所示),建议按照1:8进行传代,如果密度偏低,则可降低传代比例;密度偏高,则增加传代比例。
注:1:8传代就是1个孔瓶传8个孔(以6孔板为例)。
3. 将 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(~25℃)。
4. 根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的hESC/iPSC完全培养基,并按1:4000比例加入hESC/iPSC Supplement C,恢复至室温(~25℃)。
5. 将 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(~25℃)。
6. 根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的hESC/iPSC完全培养基,并按1:4000比例加入hESC/iPSC Supplement C,恢复至室温(~25℃)。
7. 将孔内培养基吸取,加入2 mL/孔的DPBS(不含钙镁),轻轻摇晃并吸取。
8. 加入2 mL/孔的 hESC/iPSC Passage Solution使溶液完全覆盖孔底。
9. 置于37℃培养箱中孵育8-9 min。
注:① 消化8-9 min后镜下观察细胞变化,当大部分细胞变亮变圆,且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化,若大部分细胞仍未变亮,则需要延长消化时间;
② 保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触,使6孔板受热均匀,不要叠放。

hESC/iPSC完全培养基连续培养hESC细胞形态图

10. 消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜,避免震荡摇晃细胞,倾斜并吸除hESC/iPSC Passage Solution。
11. 及时加入2 mL/孔预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C,水平十字摇晃6孔板使细胞脱离基质。
注:① 加hESC/iPSC完全培养基 + hESC/iPSC Supplement C时,可轻柔吹打细胞1-2次,不能超过2次,避免反复吹打;有部分细胞(10%~15%)未脱离基质是正常现象,若有大量细胞未脱离则需延长消化时间(< 10min)。

消化hESC细胞不同时间形态图

②hESC(H1)细胞不能长时间处于hESC/iPSC Passage Solution(<15 min),所以收集接种细胞时操作必须快速,以及最好一次操作不要超过4孔(六孔板)。
12. 吸取6孔板中的Matrigel溶液,加入预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C 2 mL/孔。
13. 在6孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人。将步骤9获得的细胞悬液轻轻摇匀,按预先设定的传代比例均匀分配于孔板中。 注:为了铺板均匀并降低对细胞的损伤,可以将步骤9获得的细胞悬液收集至2mL离心管,轻柔颠倒混匀细胞1-2次;再按照传代比例接种。
14. 接种后,水平十字摇匀6孔板三次,置于37℃,5% CO2浓度,饱和湿度的培养箱中, 再次水平十字摇匀6孔板三次,培养过夜。
15. 18-24小时后更换新hESC/iPSC完全培养基,此后每天换液,4-5天后继续传代/冻存。
注意事项

 1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 

2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。

1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存;
2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。
到货须知

1.收到细胞后,及时拍照记录有无漏液、浑浊或瓶身破损现象。
2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。          
 4.  仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。
  三、细胞冻存操作
冻存液配方无血清冻存液,液氮储存
细胞密度待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
冻存方法3)冻存hESC/iPSC(以6孔板为例)
1. 当细胞汇合度达85%左右(如图1(C-D)所示)可收获冻存,一般6孔板每孔可冻存1管。
2. 准备相应数量的1.5/2 mL冻存管,标记细胞名称、代次(P#)、日期、操作人。
3. 取出4℃冰箱中的 hESC/iPSC Cryopreservation Solution,置于室温预温,使用前注意摇匀。
4. 吸取上清液,加入2 mL/孔的DPBS(不含钙镁),轻轻摇晃数次,再吸取。
5. 加入2 mL/孔的hESC/iPSC Passage Solution,将细胞置于37℃培养箱中,计时8-9 min(可参考“六、传代hESC/iPSC”步骤)。
6. 消化结束,轻轻取出培养板,吸取hESC/iPSC Passage Solution。
7. 摇匀预温的hESC/iPSC Cryopreservation Solution,每孔加入1 mL冻存液,轻柔吹打,水平十字摇匀3次,随后吸取细胞悬液加入1.5/2 mL冻存管中。
8. 将细胞置于梯度程序降温盒中,并置-80℃冰箱中过夜,次日转入液氮罐中长期保存。
注意事项冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案
  四、售后服务
重发标准

1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;

2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发;

3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发;

4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发;

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发;

6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发;

7.视具体情况而定。

不予重发

1.客户操作造成细胞污染,不重发;

2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发;

3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;

4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发;

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发;

6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发;

7.视具体情况而定。

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