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单克隆稳定株和混合稳定株如何选择

时间:2022-09-30 09:57:16 点击:1594次

一、单克隆稳定株和混合稳定株概念

单克隆稳定株:来源于含有稳定整合外源片段的单个细胞的扩增。

混合稳定株:由多个单克隆稳定株混合构成的克隆群,不同的单克隆其外源片段的整合位点不一样。

单克隆稳定株和多克隆稳定株特点


单克隆稳定株
多克隆稳定株
表达稳定稳定
克隆单克隆多克隆
遗传特点性状单一性状不单一

二、单克隆稳定株和混合克隆稳定株如何选择

1.什么时候选择混合克隆稳定株

由于不同细胞基因组背景存在差异,且不同整合位点的单克隆细胞株表现出来的细胞表型可能不一致,所以使用混合克隆株更能去除细胞间差异造成的干扰,否则需要对多个单克隆稳定株进行比较,才能获得更精确的实验数据。

为了去除细胞间差异,得到更精确的实验结果,我们推荐您使用慢病毒感染,或者构建混合克隆稳定株!

● 感染效率70%~80%以上即可直接实验,不会受到质疑

● 高分低分文献都使用混合克隆,国际承认

● 筛选单克隆株至少要用两株细胞来去除细胞间差异,工作量翻倍,费用较高

2.为什么要挑选单克隆稳定株

多克隆细胞系构建成功后由于不同细胞克隆生长速度不一致,目的基因表达量比较低的细胞克隆增殖速度一般更快,因此在最初的10代左右会观察到表达量逐渐下降,最后高表达量低增殖速度的细胞消失,低到中等表达量的细胞组成稳定表达克隆。

对于转染效率和表达效率低的细胞系,多克隆细胞筛选得到的细胞系中目的基因的表达量有可能不能满足实验要求。

单克隆细胞系在细胞克隆挑选后可以对目的基因表达量进行检测,挑选出高表达的细胞克隆进行培养。这一步骤在转染效率低的细胞株中尤其重要。

做细胞亚定位的稳定细胞系,存在表达量过低、荧光信号不够强,以及表达量过高、荧光蛋白聚集导致不能正确定位两种问题。单克隆细胞系挑选可以直接选出定位正确的细胞克隆。

3.什么时候选择单克隆稳定株

多克隆细胞株筛选比较快速,费用较低。单克隆细胞株筛选周期长,费用高。因此如果多克隆细胞株可以满足实验要求,就没有必要筛选单克隆细胞株了。

在需要构建的细胞株转染效率高,目的基因表达效率高的情况下,单克隆细胞株后得到的表达效果和多克隆细胞株并没有显著差异。这时多克隆细胞筛选是理想的选择。反之则应选择单克隆细胞筛选。需要进行细胞亚定位实验的细胞系通常建议进行单克隆细胞筛选。

由于不同细胞系差异较大,直接判断进行哪种实验方案是很困难的。为此,我们提供免费预实验服务,对您提供的细胞进行慢病毒转染预实验,实验后提供实验方案建议及细胞系构建可行性评估。

单克隆稳定株和多克隆稳定株选择指南

 推荐推荐服务类型
细胞特点单克隆稳定株
多克隆稳定株
转染效率高
基因过表达率高
细胞亚定位实验
rna干扰细胞系
难转染的细胞
表达率低的基因

4.怎么判别筛选的稳定株是单克隆

1)如果外源片段含有荧光标记,可以直接使用流式细胞仪检测其荧光是否均一; 如果还有其它标签,可以进行免疫荧光标记,再使用流式细胞仪观察荧光分布是否出现均一峰值。因为不同单克隆由于整合位点不一样,其表达强度也会受附近染色体结构的影响,出现差异。

2)如果外源片段不含任何标签或者荧光标记,则可以使用分子生物学比如Southern Blot的方法鉴定。

3)使用96孔板稀释法筛选,得到的阳性克隆一般是单克隆。因为最初如果混有非整合细胞,则含有整合外源片段的单细胞多半会失去生长优势,无法得到阳性克隆。使用单克隆环法,如果挑取的是致密,单一的克隆,那么多半也是单克隆。

三、总结

当需要去除细胞群体干扰因素的时候,推荐使用单克隆稳定细胞株,其基因组背景相对单一,对实验结果干扰因素小。当进行系统生物学研究时,需考虑细胞群体因素,同时也是由于不同细胞个体差异大,而且不同整合位点的单克隆细胞株表现出来的细胞行为可能不一致,所以许多实验使用混合克隆株更能去除细胞间差异造成的干扰。因此,选择单克隆细胞株还是混合克隆细胞株,需要根据实验目的而定。

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