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细胞活性检测

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)

货号:IMC-906-5 mL

价格:
 350元
1200元

规格:

货期:现货

  • 产品信息

逸漠Cell Counting Kit-8(CCK-8 试剂盒)说明书下载

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产品简介

Cell Counting Kit-8,简称CCK-8(或CCK8)试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其检测原理在于,在电子耦合试剂存在的情况下,检测试剂中的WST-8化合物被活细胞内脱氢酶还原成具有水溶性的橙黄色甲臜化合物,该物质在450 nm处有最大吸收峰。甲臜量与活细胞数成正比,即细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可 以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳 定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。
本试剂盒中WST-8对细胞无明显毒性,可以用于外源细胞因子等诱导的细胞增殖检测,以及药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测,是MTT检测方法的升级版。 本试剂盒使用便捷,无需配制或稀释,无需收集或洗涤细胞,无需对甲臜化合物进行再次溶解,对贴壁细胞及悬浮细胞均适用。且酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

使用说明

1.制作标准曲线(测定细胞具体数量)
(1)先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
(2)按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
(3)接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)
2.细胞活性检测
(1)在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
(2)向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
(3)将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
(4)用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
(5)若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
3.细胞增殖-毒性检测
(1)在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃, 5% CO2)。
(2)向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。
(3)将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
(4)向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
(5)将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
(6)用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
(7)若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
4.活力计算:
细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[ A(0 加药)-A(空白)]×100
A(加药):具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0 加药):具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

注意事项

1.本试剂盒检测原理是依赖于脱氢酶催化的反应,样品中如有较多还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,需设法去除。
2.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
3.白细胞可能需要培养较长时间。
4.当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为 1 ,000 个/孔 (100 µL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 ( 100 µL 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK-8 溶液。
5.如果没有 450 nm 的滤光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片,但是 450 nm 检测灵敏度最高。
6.培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
7.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈 最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸 发。
8.加检测试剂时避免产生气泡,否则会干扰检测结果。
9.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
10.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

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