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贴壁细胞传代

时间:2021-09-21 16:53:01 点击:2539次


本视频为厦门逸漠生物出品关于贴壁细胞传代培养步骤操作指南,我们对每一步操作都做了演示,以便实验者更好地理解贴壁细胞传代实验过程。

贴壁细胞传代实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌,工作台开灯通风10min,用75%酒精擦拭台面

贴壁细胞传代所需试剂物品

细胞培养液,胰酶,PBS,培养皿等

贴壁细胞传代步骤

从培养箱拿出细胞,在显微镜下观察细胞密度和细胞状态,当细胞状态良好,且密度达到80%以上时,即可进行传代

第一步:将细胞培养皿放入超净工作台中,吸去上清,沿血壁加入5ml PBS

第二步:轻洗细胞表面,洗去表面培养基,再将PBS弃去

第三步:加入2ml胰酶,37℃消化1-2分钟,显微镜下观察细胞是否脱落

第四步:加入3ml完全培养基终止消化,将细胞吹散,移入15ml离心机管中,1000rpm,离心5min

第五步:取两个新的培养皿,各加入8-10m1完全培养基,在培养皿上标记细胞名称,日期和所用培养基名称

第六步:离心结束后,用75%的酒精喷管身后,放回工作台中,吸去上清

第七步:取2ml完全培养基重悬细胞,平均分配到2个皿中,“8字法”摇匀后,镜检是否铺匀

第八步:把培养皿放入C02培养箱中培养,第二天观察贴壁情况

注意事项

1.培养过程中需维持细胞处于对数生长期,80%左右即可传代,传代比例请参照说明书建议

2.消化时间不宜过长,大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化,难消化的细胞可分次消化,每次时间不超过5min

3.培养过程中需要定期换液,一般细胞建议2-3天换液一次

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