一、细胞基本属性 | ||||
细胞简介 | IDG-SW3在体外复制成骨细胞至晚期骨细胞分化,并在体内增加骨形成。可用于研究成骨细胞向骨细胞的转化、骨细胞功能的生物矿化机制以及SOST/sclerostin和FGF-23的调控。该细胞可表达早期到晚期骨细胞系列标志物,包括Dmp-1-GFP,E11/gp38,SOST/sclerostin和FGF-23。 | |||
细胞全称 | IDG-SW3小鼠骨髓细胞 | |||
种属来源 | 小鼠 | |||
组织来源 | 骨髓 | |||
生长特性 | 贴壁生长 | |||
细胞形态 | 粘附性成骨细胞样 | |||
注意事项 | 在33℃下添加了INF-γ,细胞可以保持未分化状态下,允许大规模传代而不损失表型;若在37℃下不含INF-γ条件下培养,基因表达与原代细胞一致。撤除IFN-γ后24小时内细胞进入G0/G1期停滞,需严格按时补加。该细胞在2D和3D培养中都能够进行维持,具有长期生存能力(35-50天)。 | |||
增殖培养基 | Alpha-MEM (含L-谷氨酰胺和脱氧核糖核苷)+10% FBS+1% P/S+50 U/ml INF-γ,生长条件:二氧化碳,5% 温度:33摄氏度 | |||
分化培养基 | Alpha-MEM (含L-谷氨酰胺和脱氧核糖核苷)). +10% FBS+1% P/S+50μg/ml抗坏血酸+4 mM β-甘油磷酸酯,生长条件:二氧化碳,8% 温度:37摄氏度 | |||
低温贮藏 | 60% Alpha-MEM+30%FBS+10%DMSO | |||
胶原包被培养皿 | 大鼠尾Ⅰ型胶原 | |||
细胞代数 | 10代以内 | |||
生物安全等级 | 1 | |||
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 | |||
支原体检测 | 无 | |||
细胞货期 | 1周左右,现货 | |||
发货方式 | 复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 | |||
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
二、细胞培养操作 | ||||
复苏 | 1.配制增殖培养基 在100ml基础培养基中加入2500 U的INF-γ,使用前预热到33℃ 2.细胞复苏 1) 将恒温水浴锅中的水预热到33℃; 2) 戴上护目镜,厚毛线手套后,从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入恒温水浴锅中复温,不断震荡冻存管以提高复温速率; 3) 将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5mL完全培养基的15mL离心管中,充分混匀后,500g离心5min; 4) 离心完成后弃去上清,用1mL增殖培养基重悬细胞后,转入T-25细胞培养中,再加增殖培养基4mL,置于大鼠尾Ⅰ型胶原包被细胞培养皿中,之后转入CO2培养箱中培养静置。 5)每2-3天更换一次培养基。细胞最初生长缓慢,但复苏后2-3天开始快速增殖。 注意:从液氮中取出细胞冻存管时,若冻存管内有液氮进入,需拧松冻存管,排出内部残留的液氮,之后拧紧冻存管,置于干冰上,然后放入37℃水浴中,避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。 | |||
分化 | 1)将细胞以4×104个细胞/cm2的密度铺板至增殖培养基中,使它在2天内融合。利用33℃培养箱进行孵育,细胞密度差异大可能会影响细胞分化,因此尽量保持一致。 2)为了诱导细胞分化,需在不含IFN-γ的培养基中进行培养,并在37℃、8%CO2的培养箱中进行孵育。诱导分化的方法是在普通培养基中加入50μg/ml 抗坏血酸和4mM β-甘油磷酸酯,混合后加入培养物中。 3)分化培养基应该每2-3天更换一次 4)在鼠尾胶原包被板上培养细胞对于维持骨细胞表型很重要 5)细胞系的分化可以通过荧光显微镜检测培养物来进行评估。细胞在Dmp1启动子的控制下表达GFP。在成骨条件下,GFP的表达通常在培养3-4天开始观察到,在培养10-14天表达较强。Dmp-1和SOST在细胞分化第21天表达。FGF23的表达需要更长的时间,因此建议将细胞培养28-35天,来观察FGF23的表达变化。不同实验室条件均有差异,尤其是不同血清条件下,具体按照实际情况进行。 | |||
培养注意事项 | 1.收到常温细胞后,首先观察细胞瓶是否完好,有无漏液现象,若有上述问题发生请及时和我们联系。 2.显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,属正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将细胞培养瓶置于37℃培养箱静置2-4 h,以便稳定细胞状态。 3.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、生长特性、所用培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 4.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据)。 5.细胞体外扩增培养周期有限,建议使用IMMOCELL配套的专用培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。 6.细胞体外扩增建议10天内进行实验。两周后状态活性不佳导致而导致实验出现问题,责任由客户自行承担。 7.建议进行细胞培养后,前3天定期拍照,记录细胞状态,若观察到异常或对细胞有疑问,请及时与代理商或我们联系。对于细胞培养操作及培养注意事项有疑问的,可与我们的技术支持交流。 8.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,可用于稳定细胞状态。请按照说明书细胞培养条件来培养 | |||
备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 | ||||
三、售后服务 | ||||
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 | |||
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |
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