IDG-SW3小鼠骨髓细胞

在100ml基础培养基中加入2500 U的INF-γ，使用前预热到33℃

2.细胞复苏

1) 将恒温水浴锅中的水预热到33℃；

2) 戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入恒温水浴锅中复温，不断震荡冻存管以提高复温速率；

3) 将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5mL完全培养基的15mL离心管中，充分混匀后，500g离心5min；

4) 离心完成后弃去上清，用1mL增殖培养基重悬细胞后，转入T-25细胞培养中，再加增殖培养基4mL，置于大鼠尾Ⅰ型胶原包被细胞培养皿中，之后转入CO2培养箱中培养静置。

5）每2-3天更换一次培养基。细胞最初生长缓慢，但复苏后2-3天开始快速增殖。

注意：从液氮中取出细胞冻存管时，若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，置于干冰上，然后放入37℃水浴中，避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。

2)为了诱导细胞分化，需在不含IFN-γ的培养基中进行培养，并在37℃、8%CO2的培养箱中进行孵育。诱导分化的方法是在普通培养基中加入50μg/ml 抗坏血酸和4mM β-甘油磷酸酯，混合后加入培养物中。

3)分化培养基应该每2-3天更换一次

4)在鼠尾胶原包被板上培养细胞对于维持骨细胞表型很重要

5)细胞系的分化可以通过荧光显微镜检测培养物来进行评估。细胞在Dmp1启动子的控制下表达GFP。在成骨条件下，GFP的表达通常在培养3-4天开始观察到，在培养10-14天表达较强。Dmp-1和SOST在细胞分化第21天表达。FGF23的表达需要更长的时间，因此建议将细胞培养28-35天，来观察FGF23的表达变化。不同实验室条件均有差异，尤其是不同血清条件下，具体按照实际情况进行。

2.显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，属正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将细胞培养瓶置于37℃培养箱静置2-4 h，以便稳定细胞状态。

3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、生长特性、所用培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

4.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）。

5.细胞体外扩增培养周期有限，建议使用IMMOCELL配套的专用培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

6.细胞体外扩增建议10天内进行实验。两周后状态活性不佳导致而导致实验出现问题，责任由客户自行承担。

7.建议进行细胞培养后，前3天定期拍照，记录细胞状态，若观察到异常或对细胞有疑问，请及时与代理商或我们联系。对于细胞培养操作及培养注意事项有疑问的，可与我们的技术支持交流。

8.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，可用于稳定细胞状态。请按照说明书细胞培养条件来培养

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发；

3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发；

4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发；

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发；

6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发；

7.视具体情况而定。

1.客户操作造成细胞污染，不重发；

2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发；

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发；

7.视具体情况而定。