产品简介
Dispase II,中文名分散酶II,一种非特异性金属蛋白酶,细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞,并用于后续细胞培养,如原代细胞的分离,细胞传代等。另外,Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶(如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等)相比,该酶具有以下优势:1)一种快速有效且温和的细胞消化酶,对细胞损伤小,且能维持细胞膜完整性;2)来源于细菌,无支原体或其他动物病毒污染;3)稳定性强,不受温度、pH及血清组分的影响;4)可用于多种类型组织和细胞的分离等。
本品非无菌Dispase II,来源于Bacillus polymyxa,使用时需对其除菌处理,用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
酶活力单位定义
在37℃,pH7.5 的条件下,每分钟水解酪蛋白释放出相当于1 µM(181 µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量,即为一个蛋白酶活性单位,以U表示。
使用说明
1.Dispase II储存液的配制
(1)用Hepe缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解适量本品冻干粉,配制成10 mg/mL的储存液,用0.22 µM滤膜过滤除菌。
(2)使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可,用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
注:不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
2.组织的解离
(1)用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块;
(2)用无菌PBS清洗组织块;
(3)向上述组织块中加入Dispase II溶液(工作浓度为0.6-2.4 U/mL),并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。
(4)37℃孵育,孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。注:若第一次使用该酶,可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织,1h即可达到分离目的,但更长时间(如数小时)的孵育也不会明显影响细胞活性。
(5)如有需要,可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤,以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞,若是需要,换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
(6)离心沉淀细胞,倒掉酶溶液;
(7)用培养基重悬细胞沉淀,并于常规条件下培养细胞。
3. 细胞传代
(1)利用Dispase 溶液(37℃预热)浸没细胞,于37℃孵育5 min;
(2)吸除上述溶液,继续于37℃孵育10 min;
(3)显微镜下观察细胞分离情况,如需要,可进一步孵育15 min;
(4)利用细胞培养基悬浮细胞,轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞;
(5)换用新鲜细胞培养液重悬细胞,并按常规方法进行细胞铺板。
注意事项
1.储存液于4℃可稳定保存2周,若长期保存,请分装后于-20℃冻存,2个月有效。避免反复冻融。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。