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细胞培养实验室配置和常用设备介绍

时间:2022-11-25 11:15:00 点击:1066次

细胞产品是很多科研老师实验研究的基础,一支小小的细胞,关乎各种实验的成功与否,细胞的”小事情“,在实验中都是”大事情“,所以准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒。

细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。三室既相互连接又相对独立,各自完成培养过程中的不同操作。

细胞培养实验室配置和常用设备

1.实验室设置

(1)配液室

(2)准备室

(3)培养室

培养室内要完全密闭,保持恒定的温度,在设计上要注意以下几点

a.培养室的位置最好设在阴面,阳光不能直接照射的地方,防止室内温度增高。

b.天花板的高度不要超过2米,以保证紫外灯的有效杀菌效应,

c.门一般用拉门,以防止空气流动。

d.天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角,要镶瓷砖或涂油漆,这样设计,一是便于清洗和消毒,另外也不易在墙角堆积灰尘。

2.实验室常用设备

(1)准备室的设备

a.双蒸馏水蒸馏器:制备双蒸水。

b.酸缸:盛洗液,浸泡玻璃器具。

c.烤箱:洗涤完的玻璃器皿用烤箱烘干。

d.高压锅:玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。不同物品其有效灭菌压力和时间不同。

e.储品柜1:放置未消毒物品。

f.储品柜2:放置已消毒物品。

g.包装台:灭菌前的包装用。

准备室注意事项

a.预防蒸馏器被烤干。

b.放置水池中的水渗出。

c.勿将酸液溅到衣物或地面。

d.勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。

e.已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。

(2)配液室的设备

a.天平(扭力天平和电子天平):称量用

b.pH计

c.磁力搅拌器

(3)细胞培养室的设备

1)超净工作台

超净工作台的种类很多,有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等,其工作原理是利用鼓风机,使通过高效滤气的空气,徐徐通过台面,这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。

根据层流方式的不同,超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种,基本原理大致相同,都是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器,由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。但两种净化台的气流方向不同。

使用超净工作台应注意的几点问题

a.净化工作台最好安装在无尘的房间内,最好为隔离好的无菌间内,以免尘土过多易使滤器阻塞,降低净化效果,缩短使用寿命。

b.新安装的或长期未使用的工用台,工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。

c.每次使用工作台时,应先用75%酒精擦洗台面,并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。

d.净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流型不受干扰。

e.一般情况下,高效过滤器三年更换一次。更换高效滤器应请专业人员操作,以保持密封良好。要定期将粗过滤器中的过布(无纺布)拆下清洗,时间应根据环境洁净程度而定,通常间隔3~6个月进行一次。

f.每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品,并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。

2) 4℃冰箱和低温冰箱

3)CO2 培养箱

a.一定浓度的CO2 对细胞生长,尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用(5%)。

b.一定浓度的CO2 可维持培养液恒定的pH。适用于开放培养,培养箱封口后,可在一般恒温培养箱内培养,但是采用培养皿或多孔板培养时,则需要高湿度和高CO2 含量的空气。

c.它增加了湿度,箱体内装有水浴,可以保证培养箱内的湿度。

d.培养箱内装有紫外灯。

e.通过气体流量计可以调节CO2 和空气的比例。

f.在水中可加入防腐剂(二氧乙酸)。可防止因CO2培养箱中湿度较高,易长霉菌。

4)臭氧发生器

5)离心机

6)CO 2 钢瓶

7)液氮罐

8)储品柜:用来存放杂物

9)紫外灯

10)>空气净化系统

11)倒置显微镜

3.无菌操作

(1)无菌室的灭菌

a.紫外灯无人时就要打开;

b.进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩;

c.每周清洗消毒一次;

d.所用物品要以外科手术方式严格消毒;

e.室内台面。

细胞培养人员注意事项

1)进入细胞房前必须穿上已消毒的实验服,换拖鞋,并将实验服袖口向内卷起,将其它衣服袖口包于其内。

2)进入细胞房,戴上手套,开紫外灯半小时。半小时后,用酒精棉将工作台擦拭一遍,并喷洒酒精,对工作台及其内物品内进行消毒;点燃酒精灯。

3)依次放入装培养液的试剂瓶,培养瓶,小牛血清瓶,胰酶离心管,DMSO瓶,双抗瓶,PBS 瓶,50ml 烧杯两个,100-1000ul 移液器,一次性滴管若干,空离心管两个(15ml)。

4)所有放入超净工作台或细胞培养箱内的物品,如手套,记号笔,离心管,试剂瓶,滴管,冻存管,培养瓶,试管架,枪头盒,移液器,烧杯,96孔板等需先75%酒精消毒后,方可放入工作台或培养箱内。

5)所有放入工作台内的试剂瓶或离心管均需过火三次:打开瓶盖前,打开后,取液毕关上瓶盖前均需在酒精灯火焰上过一下火。

6)任何取液过程均不能让一次性滴管触及瓶口,试剂瓶或离心管开盖后,瓶盖应侧放。

细胞要养好,需要各位科研老师耐心,温柔的呵护,建议使用品质良好的细胞株和培养基,同时提前做好细胞培养准备工作,事半功倍。

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