二甲基亚砜（DMSO）是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。
DMSO是目前最常用的细胞冻存保护剂，那么细胞冻存时DMSO和血清比例配制是多少？
一般使用时终浓度控制在5~10%，最佳浓度取决于细胞类型。
一般来说，存活率比较高的细胞系，培养基、血清、DMSO按照7：2：1的比例新鲜配制使用。
细胞计数后，用配制好的细胞冻存液重悬细胞，至5×10^6 ~ 1×10^7 cells/mL，然后1~1.5mL/管分装冻存。
对于存活率较低的细胞系，或者需要长时间保存的细胞系，可以增加冻存液中的血清浓度，血清和DMSO按9：1的比例配制。
另外，还有商品化的无血清冻存液可以选择，不需要预先配制。一般会含有多种保护剂成分，适用于特别珍贵的细胞的保存，例如干细胞、分离后的免疫细胞等等。
细胞冻存操作步骤
1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍；
2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化；
3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min；
4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，转移到冻存管中，注意冻存管做好标识；
5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。
细胞冻存细节注意
1.冻存步骤中包含了消化的大部分步骤。
2.冻存液常规配比为培养基：血清：DMSO=7:2:1，如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=9:1；
3.如果没有程序降温盒，可以将冻存细胞依次放于4度1h，-20度2h，-80过夜，大部分细胞也可以适应，但原代细胞不建议这么处理；
4.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年，液氮中通常不建议超过2年；
5.细胞如果是第一次养，建议至少冻存两个批次以上，以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种；
另外，还有一些是无血清培养的细胞，也不能添加血清，这时就用无血清培养基（根据细胞特性定制的培养基）加入5-10%的DMSO来冻存。
细胞类型和细胞株个体特性。不同细胞有其冻存条件，不尽相同，需参考说明书和文献。如果发现细胞冻存后状态不佳，需要自己摸条件，或考虑污染和培养条件问题。
相关问答
-
细胞增殖速度怎么变得这么慢了？细胞发生病变，出现细胞变圆、从培养瓶壁脱落又是什么情况？要疯了，培养细胞怎么就这么难呢~实验过程中存在的“幽灵”，即使是经验丰富的老研究员也不得不面对，没错，它就是支原体感···...
阅读详情 -
胎牛血清和小牛血清的差别在哪里？ 胎牛血清和小牛血清的差别在哪里？ 胎牛血清(FBS) :从八月龄胎牛心脏穿刺取血。适用于专业的研究和试验，包括干细胞研究、免疫分析和抗体生产。 新生牛血青/小牛血清(NBCS) :从自出···...
阅读详情 -
适合细胞长期保存的温度是多少？ 适合细胞长期保存的温度是多少？ 细胞长期保存温度是-130°C或更低。液氮罐中气态层温度在-140°C至-180°C之间细胞可保存在气态层或浸入液氮中，如果可以最好保存在气态层，因为这样···...
阅读详情 -
如何在细胞铺板时避免“边缘效应”？ 如何在细胞铺板时避免“边缘效应”？ 以下这三点一定要注意!细胞实验铺板时，为避免“边缘效应”,以应用96孔板的中间60孔为最佳，一般四周的一圈边缘孔不养细胞，只做空白或阴性···...
阅读详情 -
如何收获需要冻存的细胞?最佳是什么时候？如何收获需要冻存的细胞?最佳是什么时候？用来冻存的细胞一般选择在细胞约铺满90%的时候，这时细胞生长状态好，细胞数量也多并且在收获细胞前24小时换一次培养液。收获用来冻···...
阅读详情 -
培养基中谷氨酰胺究竟有什么作用？培养基中谷氨酰胺究竟有什么作用？几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以各种培养液中都含有较大量的谷···...
阅读详情
