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细胞冻存时DMSO和血清比例配制是多少

时间:2022-11-28 15:26:46 点击:2143次

二甲基亚砜(DMSO)是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中,为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内离子浓度,减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。

DMSO是目前最常用的细胞冻存保护剂,那么细胞冻存时DMSO和血清比例配制是多少?

一般使用时终浓度控制在5~10%,最佳浓度取决于细胞类型。

一般来说,存活率比较高的细胞系,培养基、血清、DMSO按照7:2:1的比例新鲜配制使用。

细胞计数后,用配制好的细胞冻存液重悬细胞,至5×10^6 ~ 1×10^7 cells/mL,然后1~1.5mL/管分装冻存。

对于存活率较低的细胞系,或者需要长时间保存的细胞系,可以增加冻存液中的血清浓度,血清和DMSO按9:1的比例配制。

另外,还有商品化的无血清冻存液可以选择,不需要预先配制。一般会含有多种保护剂成分,适用于特别珍贵的细胞的保存,例如干细胞、分离后的免疫细胞等等。

细胞冻存操作步骤

1.用移液器吸走原培养基,加入适量PBS洗1-2遍;

2.加入适量胰酶,置于培养箱中消化;

3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化,800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液,待细胞离心后去上清,加入冻存液重悬,转移到冻存管中,注意冻存管做好标识;

5.将冻存管放入程序降温盒中,-80度过夜,然后转移到液氮中保存。

细胞冻存细节注意

1.冻存步骤中包含了消化的大部分步骤。

2.冻存液常规配比为培养基:血清:DMSO=7:2:1,如果细胞比较珍贵,可以调整为血清:DMSO=9:1;

3.如果没有程序降温盒,可以将冻存细胞依次放于4度1h,-20度2h,-80过夜,大部分细胞也可以适应,但原代细胞不建议这么处理;

4.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年,液氮中通常不建议超过2年;

5.细胞如果是第一次养,建议至少冻存两个批次以上,以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种;

另外,还有一些是无血清培养的细胞,也不能添加血清,这时就用无血清培养基(根据细胞特性定制的培养基)加入5-10%的DMSO来冻存。

细胞类型和细胞株个体特性。不同细胞有其冻存条件,不尽相同,需参考说明书和文献。如果发现细胞冻存后状态不佳,需要自己摸条件,或考虑污染和培养条件问题。

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