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293细胞培养技术

时间:2022-11-11 10:29:38 点击:1557次

293细胞是人肾上皮细胞系,有多种衍生株,比如HEK293,293T/17等,来源都是人胚胎肾细胞,其极少表达细胞外配体所需的内生受体,且比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

HEK293 细胞是人类胚胎肾细胞,起初由荷兰生物学家 Alex Van der Eb 在 1970 年代初期分离和培养。Van der Eb 实验室的博士后 Frank Graham 用剪切的腺病毒 5 (Ad5) DNA 进行转染 。这是他们的第 293 次实验,所以就命名该细胞系为 HEK293 ,细胞系的主要作用是通过细胞的基因改造实现重组蛋白合成。

产品基本信息

细胞名称:HEK293,人肾上皮细胞系

种属来源:人

组织来源:胚胎肾

细胞形态:上皮细胞样

生长特性:贴壁生长

培养基:90% DMEM+10% FBS+PS

生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

传代方法:1:2至1:3,每周 2-3次

冻存条件:无血清冻存液,液氮储存

特别注意:293细胞贴壁不牢,运输过程中细胞会有脱落,如细胞脱落,请离心收集,消化后重新铺瓶。

293细胞培养技术

293细胞培养(cellculture)技术

1.293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9~7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。

2.传代:倒去废液,PBS洗一次(轻),用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合,传代比例为1:2。

3.293细胞在低代时容易贴壁,生长良好,在传到几十代以后,易聚集成团,且贴壁不牢,用PBS冲洗时即可能脱落,即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液,最好购入时先大量冻存。

4.复苏293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的 70%~80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢,复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。

293细胞培养经验

1.用大瓶培养较小瓶要好,可能是更有利于293均匀的分布,利于营养的摄取。

2.培养液要新鲜,每次只配1000ml,分为2-4瓶,不用的培养液,冻存在-20度。

3.要及时传代,最好是细胞基本铺满培养瓶底部,但是细胞之间还没有完全贴紧,总是多少有空隙的时候最好。

4.如果细胞贴壁不好,可能是消化过久,或是培养瓶不够干净,当然要除外细胞污染。

5.如果使用用玻璃培养瓶或皿,可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿,方法是将明胶加入培养皿,使之浸泡到底面的各个部分,然后吸出,置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。如果是新的塑料培养瓶就不用处理。

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