RAW 264.7细胞培养过程中密度过大,培养基颜色发黄都易刺激细胞分化,分化的RA264.7细胞呈多角形,体积明显增大,时常有较长的黑色触角,那么RAW 264.7细胞如何避免分化及分化该处理呢?

一、RAW 264.7细胞如何避免细胞分化
RAW 264.7细胞消化时不能用胰酶消化,消化会造成细胞分化,客户可以用移液枪吹打,会比巴氏吸管方便一点。
二、RAW 264.7细胞分化处理
前面我们说到RAW 264.7不能用胰酶消化,许多实验室用细胞刮传代,这是一种非常经典好用的方法。在这边我们推荐“吹打传代”方法,其操作步骤简单,也能更好地控制细胞分化率。
(一)吹打传代操作步骤
1.轻拍几下培养皿
2.用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来
3.细胞吹下来后转移到15ml离心管
4.1200rpm(约250g) 离心3min
5.去上清,用新鲜培养基重悬细胞
6.按比例接种到新的培养皿中
(二)吹打传代时机
1.当细胞密度较低的时候,可能不太好吹下来。
2.当细胞密度达到80%~90%的时候,最容易吹下。
(三)操作注意事项
1.RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好;
2.分化的细胞贴壁牢固,传代的时候请勿强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞;
3.吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;
4.细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关,有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况,连分化细胞都贴壁较松,此时更适宜用巴氏管吹打;
5.培养时,无法保证100% 不分化,通过传代可以将分化比例控制在一定范围.
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