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第二节:小鼠小肠类器官传代教程

时间:2023-05-24 10:30:27 点击:245次

小鼠小肠类器官传代教程(以24孔板培养为例)

第一节 传代条件

1. 当孔中小肠类器官群体增殖(占胶85%左右),且平均直径为100-150 μm时,小肠类器官细胞状态良好时,即可立即传代,否则小肠类器官的生长和增殖速度会减慢,活力逐渐降低。

第二节 传代间隔和比例

1. 可根据细胞生长状态和实验需求按1:3-1:5的比列进行传代;

2. 如果细胞正常,群体增殖度85%,大小为100-150 μm,建议按照1:5进行传代;

3. 如果密度偏低,则可降低传代比例,密度偏高,则增加传代比例。

第三节 准备工作

1. 解冻分装Matrigel,预冷5 mL Immocell Reactive detergent medium ,200uL枪头;

2. 提前30 min将Immocell MLDT organoid 完全培养基,Immocell Y-27632(10 mM) 放置生物安全柜中,恢复至室温;

3.吸取4 mL Immocell MLDT organoid 完全培养基,按照1:1000比例加入4 μl的Immocell Y-27632(10 mM),充分混匀,恢复至室温;

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