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IV型胶原酶

货号:IMC-E04-100 mg

价格:
 800元

规格:

货期:现货

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逸漠IV型胶原酶说明书下载

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产品简介

胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是唯一 一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白,多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。该产品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿脑、肺和许多其他上皮组织的解聚。它还被证明可有效用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质大鼠肝细胞的分离以及肝细胞的制备。 胶原酶已用于研究晚期糖基化终产物所需的动脉组织的制备。该酶已经测试可以约1 mg/mL的浓度释放肝细胞。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为五种类型:胶原酶I型,II型,III型,IV型和Ⅴ型。
在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性),通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为IV型胶原酶,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),特别适用于胰岛组织的消化。

酶活力单位定义

在37℃,pH7.5 的条件下,5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

使用说明

1.胶原酶储存液的配制
(1)向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡盐溶液,含Ca2+、Mg2+),轻轻旋涡震荡使其充分溶解,制备成100 mg/mL(即100×)的储存液。
(2)用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌,分装成小份量,然后于-20℃避光冻存。
(3)使用前于冰上解冻,避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为:0.5-2.5 mg/mL,用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL,需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的 最佳工作浓度。
2.组织的分离
(1)使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块;
(2)利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次;
(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸没组织块,并加入胶原酶至需要工作浓度;
(4)于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
(5)已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得,收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育;
(6)利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
(7)细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
(8)于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3. 器官灌注
(1)向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率;
(2)按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液;
(3)将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛,从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来,未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育;
(4)利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
(5)细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
(6)于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

注意事项

1.储存液-20℃避光冻存。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

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