本视频为厦门逸漠生物出品关于hESC细胞培养教程之:hESC细胞冻存,我们对每一步操作都做了演示,以便科研老师更好地理解hESC细胞冻存实验过程。
hESC细胞培养教程之:hESC细胞冻存
一.冻存条件
1.显微下观察细胞状态良好,细胞汇合度达85%左右可以收获冻存,一般6孔板可收集2-4x106个活细胞/孔,可冻存一管;
二.准备工作
1.准备相应数量的2 mL冻存管;标记细胞名称,代次,日期,操作人;
2.提前从4℃冰箱中取出Immocell hESC冻存液,置于室温预温,提前将梯度程序降温盒置于4℃冰箱中预冷;
三.hESC细胞冻存步骤
1. 从培养箱中取出待冻存细胞,吸弃皿中的hESC培养基,加入2 mL/孔的DPBS,再吸弃;加入2 mL/孔的Immocell EDTA传代工作液(0.5 mM), 使溶液完全覆盖孔底,将培养板置于细胞培养箱中;
2. 注意:保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触了,使其受热均匀,不要叠放,设定消化时间10 min;
3. 消化结束后,从培养箱中取出消化的细胞,显微镜下观察细胞变化,大部分细胞变亮变圆,且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化,若大部分细胞细胞仍未变亮,则需要延长消化时间;
4. 将消化好的细胞培养板拿回生物安全柜中,避免震荡摇晃细胞,倾斜吸弃Immocell EDTA传代工作液,摇匀预温的Immocell hESC冻存液,每孔加入1mL冻存液,轻柔吹打,水平十字摇匀3次,随后吸取细胞悬液加入1.5/2 mL冻存管中;
注意:Immocell hESC冻存液中的DMSO易沉积在溶液下部,如未摇匀可能造成开始用时DMSO浓度不够,后面用的DMSO浓度过高,造成冻存细胞的不稳定,将冻存细胞置于梯度程序降温盒中,置于-80℃过夜,次日转入液氮罐中长期保存,或使用程控降温设备将细胞降至-80℃以下后,直接转入液氮储存。
热门产品推荐
-
HELA人宫颈癌细胞(STR鉴定正确)
¥1200元
-
HSF人皮肤成纤维细胞(免疫荧光鉴定)
¥1800元
-
Bel-7405人肝癌细胞(STR鉴定正确)
¥1200元
-
Hep G2人肝癌细胞(STR鉴定正确)
¥1200元
-
A549人非小细胞肺癌细胞(STR鉴定正确)
¥1200元
-
H9C2大鼠心肌细胞(种属鉴定正确)
¥1200元
大家都在看
-
hiPSC人诱导多能干细胞培养教程:在培养hiPSC细胞前,需准备好hESC/iPSC完全培养基配制和Matrigel铺板,hiPSC人诱导多能干细胞复苏操作,1. 将水浴锅预热至37℃;并将Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复···...
阅读详情 -
H9人胚胎干细胞培养条件与方法:1. 将水浴锅预热至37℃,并将Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(15~30℃);2. 取4 mL hESC/iPSC完全培养基,按照1:4000比例加入1 μL的hESC/iPSC Supplement C,···...
阅读详情 -
H1人胚胎干细胞培养指南:在培养h1干细胞之前,首先要准备好hESC/iPSC完全培养基配制, 铺板,H1人胚胎干细胞复苏步骤:1.将水浴锅预热至37℃;并将Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(15~30℃);···...
阅读详情 -
4T1细胞培养方法:小鼠乳腺癌4T1细胞培养基 90%DMEM+10% FBS+PS,生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃,4T1细胞形态特征为上皮细胞样,贴壁生长,如果4T1细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养,传代方法:1:2至1:3···...
阅读详情 -
常用人肝癌细胞系有哪些及如何选择:目前较为常用的几株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2、Hep3B、Huh-7 and PLC/PRF/5,那么人肝癌细胞株如何选择呢?一方面你可以查找相关的文献,另一方面可以考虑选择···...
阅读详情 -
HL-60细胞生长慢解决方法及如何养好:当HL-60细胞传代后生长速度慢且状态不佳时,可竖着培养直到培养基变黄,待细胞密度起来后,状态会有所好转,同时,若HL-60细胞状态很差,可采用半换液的方式:以T25瓶子为例,瓶子里有5m···...
阅读详情