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细胞培养视频

细胞冻存

时间:2021-09-22 16:52:02 点击:2632次


本视频为厦门逸漠生物出品关于细胞冻存步骤指南,我们对每一步操作都做了演示,以便实验者更好地理解细胞冻存实验过程。

    细胞冻存实验准备

    提前开启紫外照射30min消毒灭菌,工作台开灯通风10min、用75%酒精擦拭台面

    细胞冻存所需试剂物品

    细胞培养液,胰酶,PBS, 和无血清细胞冻存液

    细胞冻存步骤

    从培养箱拿出细胞,在显微镜下观察细胞密度和细胞状态,待细胞生长状态良好且存活率高的状态下,细胞密度达80%以上时,可进行细胞冻存操作

    第一步:将细胞培养皿放入超净工作台,吸去上清,沿皿壁加入5ml PBS,轻洗细胞表面,洗去表面培养基,再将PBS吸去

    第二步:加入2ml胰酶,37℃消化1-2分钟,显微镜下观察细胞是否脱落,可轻拍使未脱落细胞脱落

    第三步:加入3ml 完全培养基终止消化,将细胞吹散,移入15ml离心管中,1000rpm,离心5min

    第四步:取一定量的冻存管,打印标签,写明细胞名称,冻存日期,所用培养基,贴标签

    第五步:离心结束后,用75%的酒精喷管身后,放回工作台中,吸去上清,取1ml无血清细胞冻存液重悬细胞,后移入贴好标签的冻存管中,用封口膜密封管口

    第六步:直接将细胞放入-80度冰箱中,24h后可移入液氮中保存

    注意事项

    1.不同细胞消化时间有差异,以实际镜检结果为准,大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化,消化时间不宜过长

    2.应选择汇合度80%-90%左右,细胞处于对数生长期时进行冻存操作,确保细胞冻存时状态最佳,冻存密度可根据细胞特性进行调整

    3.我们使用的无血清细胞冻存液,可直接冻存细胞于-80度,无需程序降温

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