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H9C2细胞培养方法

时间:2022-11-28 16:04:00 点击:1521次

H9C2细胞培养说明书下载

H9C2细胞描述

大鼠心肌细胞H9C2是来源于胚胎期BD1X大鼠心脏组织的亚克隆细胞系,表现很多骨骼肌细胞的特性。当H9c2细胞汇合时,细胞就会融合成多核的肌管并对乙酰胆碱刺激有反应,但该细胞缺少像心肌细胞一样的节律性搏动。此外,多项生化、电生理指标的检测也表明其具有骨骼肌的很多特点。由于来源于心脏,H9C2细胞作为心脏成肌细胞也用于心肌疾病的研究。大鼠心肌细胞H9C2增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代,以此保证细胞具备良好的增殖能力,方便您的后继研究顺利进行。

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CCC细胞库H9C2细胞图片

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逸漠细胞库H9C2细胞图片

H9C2细胞培养实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌,工作台开灯通风10min,用75%酒精擦拭台面。

器材耗材:玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器、吸管、多孔培养皿、6cm皿、10cm皿,培养瓶等。

试剂:DMEM培养液、缓冲液、PBS、消化液、血清、抗生素。

H9C2细胞培养条件

培养基:90%DMEM+10%FBS+P/S

生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

传代方法:1:2至1:3,每周 2-3次

冻存条件:无血清冻存液(或者冷冻保存液:90%血清,10%DMSO,现用现配),液氮储存

H9c2 (2-1)细胞培养操作

H9c2 (2-1)复苏操作方法

1.将含有1 mL H9c2 (2-1)细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。

2.在1000 rpm条件下离心5 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。

3.然后将所有H9c2(2-1)胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

H9c2(2-1)细胞传代处理

如果H9c2 (2-1)细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗H9c2(2-1)细胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有H9c2 (2-1)细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

3.将H9c2(2-1)细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

H9c2(2-1)细胞冻存操作

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为例

1.收集H9c2(2-1)细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

2.根据H9c2(2-1)细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

H9c2(2-1)细胞培养注意事项

1.H9c2(2-1)细胞溶解过程要迅速,已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除DMSO。

2.H9c2(2-1)细胞冻存时,尽量吹散细胞,注意控制吹打力度。

H9c2细胞常见问题及解答

为什么H9c2细胞培养会出现细胞表面颗粒较多的现象?

可能是培养环境有问题,可以改用DMEM/F-12培养基培养,传三代后会恢复平整细胞表面。

H9C2细胞可以传几代?

细胞系是可以传代的,理论上是可以无限传代的,也就是永生化细胞,但是研究发现细胞系也会有老化的;收到细胞后自己具体可以传多少代,会受到客户自己养细胞的操作水平技术,操作环境,用的试剂耗材的质量等因素影响的。

为什么H9c2细胞培养会出现空泡?

可能是铺板时铺得不够均匀,局部过于密集,密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差,需要更换优质血清,及时换液。

为什么H9c2细胞培养长得慢?

这些因素都会影响细胞长得慢:

1.没有保证密度,细胞长不起来,可以先培养,然后消化重新铺瓶,提高密度培养

2.操作时力度没控制好,将细胞吹碎,状态变差

3.血清质量不好,影响细胞生长

为什么H9c2细胞状态变差,容易漂?

可能是血清问题,建议换血清,并注意血清要程序解冻,不能水浴化开;也有可能是细胞生长密集,需要及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长得过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。

是否可以在 H9C2 细胞系中诱导细胞肥大?

据报道,血管紧张素 II、异丙肾上腺素、内皮素-1、胆固醇(甲基-β-环糊精)、晚期糖基化终产物、去氧肾上腺素、菲、地塞米松、葫芦素-I、溴酸钾、抵抗素、高葡萄糖等可诱导大鼠细胞肥大胎儿心肌细胞 H9c2。

测量 H9C2 细胞大小的最佳染色技术是什么?

可以使用小麦胚芽凝集素 (WGA) 。它可染色细胞膜表面的糖蛋白,并可染色心肌细胞中的 t 小管 (Savio-Galimberti 等人,2008)。

H9C2 细胞培养无小事,在培养过程中,每一步操作都要轻柔小心,以免细胞受损;选用优质培养基,减少有害物质对细胞的刺激。

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