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MCF-7细胞培养条件及注意事项

时间:2022-11-25 14:09:05 点击:8405次

MCF-7细胞培养说明书下载

MCF-7细胞背景概述

MCF7 细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物。MCF-7细胞含有Tx-4癌基因;肿瘤坏死因子α可以抑制MCF7 细胞的生长,抗雌激素处理MCF-7细胞能调变IGFBP'S的分泌。

MCF-7细胞培养条件及注意事项

ATCC细胞库MCF-7细胞图片

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逸漠细胞库MCF-7细胞图片

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MCF-7细胞培养条件

培养基:89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin。

培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃,培养箱湿度70%-80%。

MCF-7细胞培养注意事项

1.必须加入胰岛素的。胰岛素是由胰岛β细胞分泌的一种多肽激素。胰岛素是无血清哺乳动物细胞培养基中的普遍添加物质。在许多细胞活动中发挥重要作用:如促进糖和氨基酸转运,提高合成代谢降低分解代谢,刺激细胞生长等等。重组人胰岛素为重组技术生产的由51个氨基酸残基组成的多肽。

2.MCF-7细胞细胞贴壁较慢,处理后最好48h后再观察。MCF-7刚复苏时长得很慢很慢,主要看贴壁的细胞是不是已经舒展开来(三角形或多边形),其次,看贴壁细胞是否开始分裂,形成一个一个的细胞群(MCF-7具上皮细胞的性质)。如果开始增殖,就是好现象。恢复后,会长得快一点,但和其他的乳腺癌细胞没得比,还是不快,传代时比例不要太大。还有,这个细胞恢复时贴壁比较慢,但贴得很牢,消化时胰酶处理要适合,免得大量的细胞仍在皿上不下来。

3.要注意MCF-7人乳腺癌细胞是一种肿瘤细胞,生长规律性差,很容易不均匀,要注意吹打的充分性。

MCF-7细胞特点

1.成团簇的形式生长

由于mcf-7细胞是三维团簇的方式生长,复苏和传代后会重新附着为三维岛(会有一些不会重新附着的簇)。生长最终会从岛屿状慢慢扩散开来,随着时间的推移,细胞会缓慢变成单层,这个时候细胞基本处于对数生长期。

2.生长缓慢

倍增时间:1.8天(PubMed=9671407);80小时(PubMed=25984343);31.2小时(PubMed=22628656)25.3小时(PubMed=24389870)25.4小时(NCI-DTP)~50小时,范围为30-72小时(DSMZ)~38小时(PBCF)。

3.传代比例

MCF-7人乳腺癌细胞是一种本身生长缓慢的细胞,当细胞培养至细胞 70-80% 的汇合度,即可进行分瓶处理,一般T25培养瓶建议1:2传代,每周可传代2-3次,如果细胞生长速度比正常的时候更慢,可以适当提高血清到20%有利于促进生长。

4.贴壁率低

MCF-7细胞在复苏、传代后,细胞会有一些漂浮状态,这些漂浮细胞是正常现象,可以视为混合的贴壁和悬浮细胞系。一般复苏、传代培养3天后漂浮细胞会再继续粘附贴壁。直到生长从岛屿扩散开来并且在培养瓶内伸展开,通常在进行换液的时候我们会补加培养基,如果一定要全换液,可以通过离心收集悬浮细胞以1000转5min,并将悬浮细胞接种到新培养瓶。

5.密度依耐性

Mcf-7细胞密度低时,生长缓慢,接种密度建议启动接种密度:8.0 x 10 4至 1.5 x 10 5活细胞/cm 2为宜;继代培养的接种密度:4.0 x 10 4 至 1.0 x 10 5 活细胞/cm 2。

MCF-7细胞培养实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌,工作台开灯通风10min,用75%酒精擦拭台面

MCF-7细胞培养操作

MCF-7细胞复苏步骤

1.将含有1 mL MCF-7细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。

2.在1000 rpm条件下离心5 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。

3.然后将所有MCF-7细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

MCF-7细胞传代处理

如果MCF-7细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

传代方法:1:2至1:3,每周 2-3次

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗MCF-7细胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

3.将MCF-7细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

MCF-7细胞冻存操作

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

冻存条件:无血清冻存液(或者冷冻保存液:90%血清,10%DMSO,现用现配),液氮储存。

下面 T25 瓶为例

1.收集MCF-7细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

2.根据MCF-7细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

MCF7人乳腺癌细胞总结

1.MCF7呈上皮细胞样,保留多个分化乳腺上皮特性。

2.MCF7细胞常用DMEM培养基,含10%胎牛血清,在37度、5% CO2培养箱中培养。该细胞复苏后贴壁相对较慢,每周2-3次更换新鲜培养基,细胞培养时需添加0.01mg/mL 胰岛素。

3.细胞对血清质量要求高,推荐使用优质胎牛血清。

4.细胞消化较快,室温消化即可消化时不要通过敲击或摇晃培养瓶来搅动细胞,以免形成细胞团。

5.细胞生长较快,需及时传代,否则容易导致整瓶细胞漂浮。

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