MCF-7细胞背景概述
MCF7 细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物。MCF-7细胞含有Tx-4癌基因；肿瘤坏死因子α可以抑制MCF7 细胞的生长，抗雌激素处理MCF-7细胞能调变IGFBP'S的分泌。
MCF-7细胞培养条件及注意事项
ATCC细胞库MCF-7细胞图片
逸漠细胞库MCF-7细胞图片
MCF-7细胞培养条件
培养基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin。
培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃，培养箱湿度70%-80%。
MCF-7细胞培养注意事项
1.必须加入胰岛素的。胰岛素是由胰岛β细胞分泌的一种多肽激素。胰岛素是无血清哺乳动物细胞培养基中的普遍添加物质。在许多细胞活动中发挥重要作用：如促进糖和氨基酸转运，提高合成代谢降低分解代谢，刺激细胞生长等等。重组人胰岛素为重组技术生产的由51个氨基酸残基组成的多肽。
2.MCF-7细胞细胞贴壁较慢，处理后最好48h后再观察。MCF-7刚复苏时长得很慢很慢，主要看贴壁的细胞是不是已经舒展开来（三角形或多边形），其次，看贴壁细胞是否开始分裂，形成一个一个的细胞群（MCF-7具上皮细胞的性质）。如果开始增殖，就是好现象。恢复后，会长得快一点，但和其他的乳腺癌细胞没得比，还是不快，传代时比例不要太大。还有，这个细胞恢复时贴壁比较慢，但贴得很牢，消化时胰酶处理要适合，免得大量的细胞仍在皿上不下来。
3.要注意MCF-7人乳腺癌细胞是一种肿瘤细胞，生长规律性差，很容易不均匀，要注意吹打的充分性。
MCF-7细胞特点
1.成团簇的形式生长
由于mcf-7细胞是三维团簇的方式生长，复苏和传代后会重新附着为三维岛（会有一些不会重新附着的簇）。生长最终会从岛屿状慢慢扩散开来，随着时间的推移，细胞会缓慢变成单层，这个时候细胞基本处于对数生长期。
2.生长缓慢
倍增时间：1.8天（PubMed=9671407）；80小时（PubMed=25984343）；31.2小时（PubMed=22628656）25.3小时（PubMed=24389870）25.4小时（NCI-DTP）~50小时，范围为30-72小时（DSMZ）~38小时（PBCF）。
3.传代比例
MCF-7人乳腺癌细胞是一种本身生长缓慢的细胞，当细胞培养至细胞 70-80% 的汇合度，即可进行分瓶处理，一般T25培养瓶建议1:2传代，每周可传代2-3次，如果细胞生长速度比正常的时候更慢，可以适当提高血清到20%有利于促进生长。
4.贴壁率低
MCF-7细胞在复苏、传代后，细胞会有一些漂浮状态，这些漂浮细胞是正常现象，可以视为混合的贴壁和悬浮细胞系。一般复苏、传代培养3天后漂浮细胞会再继续粘附贴壁。直到生长从岛屿扩散开来并且在培养瓶内伸展开，通常在进行换液的时候我们会补加培养基，如果一定要全换液，可以通过离心收集悬浮细胞以1000转5min，并将悬浮细胞接种到新培养瓶。
5.密度依耐性
Mcf-7细胞密度低时，生长缓慢，接种密度建议启动接种密度：8.0 x 10 4至 1.5 x 10 5活细胞/cm 2为宜;继代培养的接种密度：4.0 x 10 4 至 1.0 x 10 5 活细胞/cm 2。
MCF-7细胞培养实验准备
提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面
MCF-7细胞培养操作
MCF-7细胞复苏步骤
1.将含有1 mL MCF-7细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。
2.在1000 rpm条件下离心5 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。
3.然后将所有MCF-7细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。
MCF-7细胞传代处理
如果MCF-7细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗MCF-7细胞1-2次。
2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
3.将MCF-7细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
MCF-7细胞冻存操作
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
冻存条件：无血清冻存液（或者冷冻保存液：90%血清，10%DMSO，现用现配），液氮储存。
下面 T25 瓶为例
1.收集MCF-7细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
2.根据MCF-7细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
MCF7人乳腺癌细胞总结
1.MCF7呈上皮细胞样，保留多个分化乳腺上皮特性。
2.MCF7细胞常用DMEM培养基，含10%胎牛血清，在37度、5% CO2培养箱中培养。该细胞复苏后贴壁相对较慢，每周2-3次更换新鲜培养基，细胞培养时需添加0.01mg/mL 胰岛素。
3.细胞对血清质量要求高，推荐使用优质胎牛血清。
4.细胞消化较快，室温消化即可消化时不要通过敲击或摇晃培养瓶来搅动细胞，以免形成细胞团。
5.细胞生长较快，需及时传代，否则容易导致整瓶细胞漂浮。
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